甲胎蛋白(AFP)测定.doc

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1、授课对象：06级检验1-5班课时：2学时甲胎蛋白（AFP）测定目标：1.掌握ELISA法测定AFP的原理及注意事项2.熟练地进行AFP测定3.了解AFP测定的主要临床意义实验用品：AFP测定试剂盒、酶标仪内容：原理：本试剂盒采用针对抗原不同，决定簇的双单克隆抗体分别制备成包被板和酶结合物，利用ELISA双抗夹心法原理检测人血清中AFP含量。操作步骤：1.加样：将包被孔编号，留1孔作空白对照，其余孔用微量加样器依次加入标准及待测样品各100ml。2．孵育：置37℃温育30min。3．洗涤：甩去孔内液体，在各孔

2、内加入洗涤液2滴，轻轻震荡3~5次，弃之，然后用蒸馏水加满各孔，甩掉；反复5次最后在吸干纸上拍干。4．加酶结合物：每孔加入酶结合物100ml，空白孔不加。5．置37℃温育15min。6．重复步骤“3”。7．显色：每孔加入底物50μl，再加显色剂50μl，充分混匀，室温避光反应2~5min。8．终止：每孔加终止液50μl，终止反应。参考范围：0~20μg/L注意事项：1．操作前请仔细阅读说明书，应严格控制反应温度和时间。2．试剂盒使用前要充分恢复到室温。3．洗涤要彻底，防止假阳性，但不可洗涤过猛过急，而致假阴

3、性。课后小结：