CCK8测细胞存活率.docx

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1、CCK-8法测细胞存活率1、在96孔板中配置100μL的5000CelL／mL细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24h（37℃，5%CO2）。2、向培养板加入10μL不同浓度的多肽1uM、2uM、5uM、10uM。每种多肽浓度设3个复孔，并设不加细胞液的调零孔和只加细胞液、不加肽液的空白对照孔。3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间24h。4、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。5、将培养板在培养箱内孵育1-4h。6、一般用酶标仪测定在450nm处的吸光度。7、若暂时不测定OD值，可以向

2、每孔中加入10μL 0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24h内测定，吸光度不会发生变化。注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。活力计算：细胞活力*（％）=[A(加药)-A（空白）]/[A（0加药）-A（空白）]×100A（加药）：具有细胞、CCK溶液和药物溶液的孔的吸光度A（空白）：具有培养基

3、和CCK溶液而没有细胞的孔的吸光度A（0加药）：具有细胞、CCK溶液而没有药物溶液的孔的吸光度*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力多肽稀释：母液40uM100ul1000uM4ul+96ulPBS10uM60ul40uM15ul+45ulPBS　　　　　　　５uM　40ul　　　40uM　　5ul+35ulPBS2uM40ul10uM8ul+32ulPBS1uM40ul10uM4ul+36ulPBSA=pisL9K20A1-A4（10uM、5uM、2uM、1uM）=A5-A8=A8-A12B=pisL9K22TGC=pisL9

4、K22WKD=GV21-2E=空白E1-E3=100ul培养基+10ulCCK0加药E5-E7=100ul细胞+10ulCCK