油菜-BnAtg8转基因系的建立与分析.pdf

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2、、职赖王新宇教發Ｓ洽文工作．遽＾＂，４起止年月２０１２年９月至２０巧年４月苗．，；论文提交日纖２０１５年日月絶文答辩日期２０巧年５月－学泣摄予日期占；Ｊ＇校社；甘扇當兰奸Ｉ市．＇觀：－＂｜＇＇’／‘＇＇，三Ｉ．＾＼气：Ｖ＇屬擊Ｗ朋？’‘＊＇－．Ｖ％．－，：町＇－Ｓ＿＾气，：ｔ／；＂＇啤．．边Ｉ％苗，．一父乂哨原创性声明本人郑重声明：本人所呈交的学位论文，是在导师的指导下独立进行研究所。取得的成果学位论文中凡引用他人己经发表或未发表的

3、成果、数据，、观点等均己明确注明出处。除文中己经注明引用的内容外，不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研巧成果做出重要贡献的个人和集体，均己在文中明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：棒扫日期：关于学位论文使用授权的声明本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属兰州大学。本人完全了解兰州大学有关保存、使用学位论文的规定，同意学校保存或向国家有关部口或机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权兰州大学可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可

4、Ｗ采用任何复制手段保存和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或一与该论文直接相关的学术论文或成果时，第署名单位仍然为兰州大学。本学位论文研究内容：□不宜公开。，己在学位办公室办理保密申请，解密后适用本授权书＂上选项内选择其中一Ｖ＂（请在项打）论文作者签名：导师签名：乂Ｊｙ．Ｗ仪—化乂日期；日期；油菜的转基因系的建立与分析中文摘要自唯（Ａｕｔｏｐｈａｇｙ，ＡＰ）是真核生物在正常的生长发育过程中，或者遭受生一物－、非生物胁迫时细胞质组分降解再利用的方式之，对于维持细胞的稳态平衡、发育模式的重构、自体免疫及

5、抗氧化胁迫等方面都有着重要的作用。此外，有研究表明自隨还与植物的抗逆性相关。参与自睡过程的基因被称为自座相关基一因－（Ａｕｔｏｐｈａｇｙｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅ，＾７６），是基因家族重要的成员之，与自懂体的形成密切相关（ＭａｌｅｆｅｒｔｉｌｉｔＭＦ）和。此前，本课题组在雄性可育系ｙ，’不育系（Ｍａｌｅｓｔｅｒｉｌｅ，ＭＳ）的油菜（公ｒａｓｗｃｆｌＨｗｓＺ小抱子母细胞中发现存有巧．）类似植物自唆体（泡）结构，并且克隆出了基因（命名为斯的）。本实验将風的和風喀取分别导入甘蓝型油菜ＭＦ和ＭＳ系基因组建立了相应的岛巧Ｓ过表达系，旨在通过对这

6、整转基因系的形态学、遗传学、细胞生物一学和分子生物学分析，进步确认小抱子母细胞中自隨体（自晦现象）的存在及其形成机制。主要研究结果如下：（１）油菜的下胚轴为受体，结合农杆菌介导的遗传转化和离体诱导植物－－－斯再生，经过ＰＣ民鉴忠共得到８个ＭＦ及《心骑（ＭＦＡ＾８）、１０个ＭＦｚＡ骑ＧＦＰ－－（ＭＦＡＧ＾ＩＯ）、１１ＭＳＳＡ１－１ＭＳ公化４－ＳＡＧ＾ｎ侃ｉ喀Ｓ（Ｍ１）和１１ＳＧＦ戶（Ｍ）个个咨过表达转基因系。（２）在含有潮霉素平板上对Ｗ上转基因系Ｔ１代进行筛选，共得到４个具单－２ＭＦＡＧ－３ＭＳＡ－７ＳＡ－７拷贝插入的转基因杂合

7、系（ＭＦＡＧ、、和ＭＧ）。与ＭＦ－－－相比，ＭＦＡＧ２的花序茎明显变细，ＭＦＡＧ３的果英数明显减少，ＭＦＡＧ２和－ＭＦＡＧ－３－Ｇ的分支数明显减少。与ＭＳ相比，ＭＳＡ７和ＭＳＡ７分支数明显减少。（ＲＴ－ＰＣＲ４公Ｓ３）半定量检测发现，在Ｗ上个转基因系当中，喀转基因均有表达，表达水平都低于内源Ａ骑基因的表达水平。４－－（）激光共聚焦显徹镜观察发现，ＭＦＡＧ２和ＭＳＡＧ７的幼苗根尖均显示ＭＦＡＧ－ＧＦＰ黄光信号，２但美光信号定位有所不同：在中主要集中在分生区和ＭＡＧ－伸长区，而在Ｓ７中主要集中在分生区和根冠区。观察子叶原生质