人教版教学基因工程的操作一轮复习ppt课件.ppt

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1、基因工程的操作1、掌握基因操作的工具2、掌握基因操作的基本步骤3、了解获取目的基因的方法，掌握PCR技术与细胞内DNA分子复制的异同4、掌握基因操作的工具在构建基因表达载体过程中的重要意义5、掌握农杆菌转化法的过程，了解其它转基因的方法6、掌握目的基因检测的方法复习目标1基因工程的操作步骤目的基因的检测与鉴定获取目的基因构建基因表达载体将目的基因导入受体细胞2第一步：获取目的基因获取目的基因的方法从基因文库中获取目的基因基因文库包括___________和_________基因组文库cDNA文库利用PCR技术扩增目的基因PCR技术所需要的条件人工合成目的基因条件是：基因比较小，且核苷酸序列

2、已知模板原料能量酶引物3关于PCR技术中的原料和能量问题：PCR技术也是合成DNA分子的过程，属于合成反应，是消耗能量的，但图1—8中未提到能量。图1—8分析：PCR的原料是dCTP、dGTP、dATP、dTTP。这四种物质并不是必修二中我们熟悉的四种游离的脱氧核苷酸，而是脱氧核苷酸连接上了两个磷酸，和ATP一样，是高能化合物，在PCR过程中是可以提供能量的。试题中，若指出原料是dCTP、dGTP、dATP、dTTP，则条件中不再另写能量，若原料是四种游离的脱氧核苷酸，则另外还需要ATP提供能量。4PCR技术和DNA分子复制比较PCRDNA分子复制模板相同，均为DNA分子双链原料四种游离的

3、脱氧核苷酸或dCTP、dGTP、dATP、dTTP四种游离的脱氧核苷酸解旋过程高温（90～95℃），不需要酶常温，需要解旋酶DNA聚合酶热稳定DNA聚合酶（Taq酶），最适温度（70～75℃）普通DNA聚合酶，最适温度为常温引物需要不需要5构建基因表达载体基因表达载体的组成包括__________、_______、_______、_________。构建基因表达载体的条件目的基因启动子终止子标记基因目的基因运载体限制性内切酶DNA连接酶6关于限制酶的问题一般来说，不同的限制酶有不同的识别序列，有不同的切点位置，切出不同的黏性末端，但也有两种特殊情况：1.不同的限制酶有不同的识别序列，但可以

4、切出相同的黏性末端，如以下两种酶处理得到黏性末端均为AATT：酶I识别序列GAATTCCTTAAG酶IIAAAATTTTTTTTAAAA两种酶经常用于同一个基因工程中7限制酶的选择使用例题：基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。根据下图示判断下列操作正确的是A．目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割B．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割C．质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割D．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割8限制酶的选择使用变式训练1抗四环素基因EcoBBamHⅠ

5、HinDⅢBamHⅠ应选择哪种限制酶？HinDⅢ9限制酶的选择使用变式训练2抗四环素基因EcoBHinDⅢBamHⅠ使用的限制酶EcoBBamHⅠHinDⅢ含四环素的培养基上的生长情况含青霉素的培养基上的生长情况抗青霉素基因×√√×√√10关于限制酶的问题2.不同的限制酶有相同的识别序列，但可以切出不同的黏性末端，如：酶I识别序列GGAATTCCCCTTAAGG酶IIGGAATTCCCCTTAAGG黏性末端GAATTCAATT这两种酶不会在同一个基因工程中采用11将目的基因导入受体细胞将目的基因导入植物细胞最常用的方法是______________，除此外还有____________和__

6、_______。农杆菌转化法基因枪法农杆菌转化法是将含目的基因的重组质粒先转入___________细胞，再转移至____________，最后经__________________技术培养成转基因植物。花粉管通道法农杆菌受体细胞植物组织培养12将目的基因导入受体细胞将目的基因导入动物细胞最常用的方法是____________。显微注射法感受受精卵DNA受体细胞一般选择____________。将目的基因导入微生物细胞一般选择原核细胞如大肠杆菌作受体细胞，原因是____________________________________________。繁殖快，多为单细胞、遗传物质含量相对较少

7、等Ca2+转化过程中需要使用________处理大肠杆菌，使其转变成能吸收周围环境中________的_______态细胞。13目的基因的检测与鉴定检测目的基因是否导入检测目的基因是否转录检测目的基因是否翻译从个体水平上检测从分子水平上检测抗原抗体杂交技术DNA分子杂交技术14