脑脊液常规检查标准操作手册.doc

脑脊液常规检查标准操作手册.doc

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1、脑脊液常规检查标准操作手册1.目的:建立脑脊液常规检查的标准化操作;2.范围:适用于脑脊液的常规检查(物理检查、蛋白定性、细胞检查);3.标本采集:3.1标本种类:脑脊液,由临床医师进行腰椎穿刺采集,必要时可从小脑延脑池或侧脑室穿刺获得。3.2标本要求:将脑脊液分别收集于3个无菌试管中,第一管作细菌培养,第二管作化学分析和免疫学检查,第三管作一般性状及显微镜检查。每管收集1-2毫升。3.3遇高蛋白标本时可采用EDTAK2抗凝。4.标本储存:立即送检。5.标本运输:室温运输。5.标本拒收标准:污染,久置标本。6.器材试剂:5%苯酚溶液:取纯苯酚25ml

2、,加蒸馏水至500ml,用力振摇,置37℃温箱内1-2天,待完全溶解后,置棕色瓶内保存。细胞计数板;显微镜。7.物理检查:7.1目测脑脊液颜色与透明度:(1)观察颜色。(2)观察透明度。(3)观察凝块或薄膜:收集脑脊液于试管内,静置12-24小时,正常脑脊液不形成薄膜、凝块和沉淀物。7.2结果判断与分析:7.2.1颜色:正常脑脊液是无色透明的液体。在病理情况下,脑脊液可呈不同颜色改变:(1)红色:常由于各种出血引起。脑脊液中出现多量的红细胞,主要由于穿刺损伤出血、蛛网膜下腔或脑室出血引起。前者在留取三管标本时,第一管为血性,以后两管颜色逐渐变淡,红细

3、胞计数结果也依次减少,经离心后上清液呈无色透明。当蛛网膜下腔或脑室出血时,三管呈均匀红色,离心后上清液显淡红色或黄色。红细胞在某些脑脊液中5分钟后,即可出现皱缩现象,因此红细胞皱缩现象不能用以鉴别陈旧性或新鲜出血。(2)黄色:可因出血、梗阻、郁滞、黄疸等引起。陈旧性蛛网膜下腔或脑室出血,由于红细胞缺乏蛋白质和脂类对膜稳定性的保护,很易破坏、溶解,出血4-8小时即可出现黄色。停止出血后,这种黄色仍可持续3周左右。椎管梗阻如髓外肿瘤,格林-巴利综合征,当脑脊液蛋白质量超过1.5g/L时,颜色变黄,其黄色程度与蛋白质含量呈正比。化脓性脑膜炎、重症结核性脑膜

4、炎时,因脑脊液蛋白质含量明显增加而呈淡黄色或黄色。重症如核黄疸、新生儿溶血病时脑脊液也呈黄染。(3)白色或灰白色:多因白细胞增加所致常见于化脓性脑膜炎。(4)褐色或黑色:常见于脑膜黑色素瘤。7.2.2透明度:正常脑脊液应清晰透明。病毒性脑炎、神经梅毒等疾病的脑脊液也可呈透明外观。脑脊液中白细胞如超过300×106/L时可变为混浊;蛋白质含量增加或含有大量细菌、真菌等也可使其混浊;结核性脑膜炎常呈毛玻璃样微混;而化脓性脑膜炎常呈明显混浊。填写报告时用“清晰透明”、“微浑”、“浑浊”等描述。7.2.3凝块或薄膜:正常脑脊液不形成薄膜、凝块和沉淀物。若脑脊

5、液内蛋白质包括纤维蛋白质多于10g/L即可出现凝块或沉淀物,结核性脑膜炎的脑脊液静置12-24小时后,可见表面有纤维的网膜形成,取此膜涂片检查结核杆菌,阳性率较高。蛛网膜下隙梗阻时,由于阻塞,远端的脑脊液蛋白质含量常高达15g/L,此时脑脊液呈黄色胶冻状。填写报告百可用“无凝块”、“有凝块”、“有薄膜”、“胶冻状”等描述。8.蛋白定性试验(潘氏法):8.1实验原理:脑脊液中球蛋白与苯酚结合,可形成不溶性蛋白盐而下沉,产生白色浑浊或沉淀。8.2试验方法:取潘氏试剂2-3ml于小试管内,用毛细滴管滴入脑脊液1-2滴,衬以黑背景,立即观察结果。8.3结果判

6、断:阴性:清晰透明,不显雾状;极弱阳性(±):微呈白雾状,在黑色背景下才能看到;弱阳性(+):灰白色云雾状;阳性(+):白色浑浊;强阳性(3+):白色浓絮状沉淀;最强阳性(4+):白色凝块;9.细胞检查:在显微镜下对脑脊液有形成分进行计数和分类检查。9.1细胞总数:9.1.1对澄清的脑脊液可混匀后用滴管直接滴入计数池,计数10个大方格内红、白细胞数,其总和即为每µl的细胞数。再换算成每升脑脊液中的细胞数。如细胞较多,可计数一大格内的细胞×10,即得每µl脑脊液中细胞总数。如用升表示,则再乘以106。也可用生理盐水或红细胞稀释液稀释后再用人工计数,或直

7、接用血细胞分析仪进行计数;9.1.2浑浊或带血的脑脊液可用血红蛋白吸管吸取混匀的脑脊液20µl,加入含红细胞稀释液0.38ml的小试管内,混匀后滴入计数池内,用低倍镜计数4个大方格中的细胞总数,乘以50,即为每µl脑脊液的细胞总数。9.2白细胞数:9.2.1非血性标本:小试管内放入冰乙酸1-2滴,转动试管,使内壁沾有冰乙酸后倾去之,然后滴加混匀的脑脊液3-4滴,数分钟后,混匀充入计数池,按细胞总数操作中的红、白细胞计数法计数。9.2.2血性标本:将混匀的脑脊液用1%冰乙酸溶液稀释后进行计数。为剔除因出血而来的白细胞数,用下式进行校正。每µl脑脊液内白

8、细胞校正数:每µl脑脊液内红细胞数×每µl脑脊液内白细胞数=每µl脑脊液内白细胞未校正数-每µl血液内红细胞

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