生物化学水杨酸比色定糖法.ppt

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1、实验一3,5—二硝基水杨酸比色定糖法目的和要求1.掌握3,5—二硝基水杨酸比色法定糖的原理及方法。2.用3,5—二硝基水杨酸定糖法测定样品中的总糖及还原糖。实验原理3,5----二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和反应液的颜色强度呈现比例关系，利用比色法可测知样品的含糖量。该方法是半微量测糖法，操作简便，快速，杂质干扰较小。实验步骤一、葡萄糖标准曲线的绘制取9支大试管，分别按下表顺序加入各种试剂：将上述各管溶液混匀后，用721型分光光度计（520nm）进行比色测定，用空白管溶液调零点，记录光密度值。以葡萄糖浓度为

2、横坐标，光密度值为纵坐标绘制出标准曲线。二、样品中总糖和还原糖含量的测定1.样品中还原糖的提取：准确称取1g样品，放入50或100ml烧杯内，加入85％乙醇30ml，混匀，在50℃恒温水浴中保温30min，过滤，滤渣再用85％乙醇提取二次。将滤液合并，蒸去乙醇，加少量水，移入50ml容量瓶中，用水定容，备用。2.样品中总糖的水解及提取：准确称取样品1g，放入大试管中，加入1ml6mol/L盐酸和15ml蒸馏水。混匀，在沸水浴中加热半小时后，用碘化钾－碘溶液检查水解程度，若已水解完全，则不呈现蓝色。冷却后加入酚酞指示剂1滴。以10％氢氧化钠中和至溶液呈微红色

3、。过滤并定容至100ml。再精确吸取上述溶液10ml，放入100ml容量瓶中，定容，备用。3.样品中含糖量的测定：取7支大试管，分别按下表加入各种试剂：将各管混匀后，按制作标准曲线时同样的操作测定各管的光密度，在标准曲线上查出相应的还原糖含量，按下述公式推算出山芋粉内还原糖与总糖的百分含量。思考题1.比色测定的操作要点是什么？方法的基本原理是什么？2.721型分光光度计的原理及使用时的注意事项是什么？3.比色测定时为什么要设计空白管？4.总糖包括哪些化合物？