天然药物化学实验讲稿.doc

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1、第一章黄柏中小檗碱的提取、分离与鉴定教学目的要求掌握黄柏中小檗碱(季胺型生物碱)的提取原理和方法。掌握干法装柱和湿法装柱的操作方法1、掌握鉴定小檗碱(已知化合物)的一般方法。教学重点难点季铵型生物碱的理化性质及提取方法。2、渗漉法的操作过程及注意事项。3、结晶法的注意事项4、掌握薄层色谱鉴定的方法实验一黄柏中盐酸小檗碱的提取（一）实验原理根据黄柏中含粘液质较多的特点，首先用石灰乳使粘液质生成难溶于水的钙盐，用碱水自黄柏中提出小檗碱，再加盐酸使其转化为盐酸小檗碱沉淀析出。小檗碱能缓缓溶解于水中，在冷乙醇中

2、的溶解度不大，但易溶于热水或热乙醇，难溶于苯、氯仿、丙酮。小檗碱与酸结合脱去一分子水而成盐。小檗碱盐酸盐在冷水中溶解度小，较易溶于沸水，几不溶于乙醇，小檗碱的硫酸盐、磷酸盐在水中溶解度较小，与大分子有机酸生成的盐在水中的溶解度很小。黄柏中主要含有小檗碱，其结构如下季铵式（红棕色）醇式（黄色）醛式（黄色）小檗碱的三种互变异构体川黄柏含小檗碱约1.37％～5.8％，关黄柏含小檗碱约0.60％～1.64％。(二)实验方法实验二黄柏中盐酸小檗碱的纯化及鉴定一、纯化1.湿法装柱色谱法吸附剂：中性氧化铝(100～2

3、00目)35g置于烧杯中，加入50ml95％乙醇，调成浆状，湿法装柱。上样：取50～100mg自制盐酸小檗碱，溶于少量95％热乙醇中，加入色谱柱中。洗脱：95％乙醇洗脱，收集开始流出的鲜黄色带，即为纯化的盐酸小檗碱。2.结晶法抽率上次提取液，将得到的滤饼用少量水加热溶解，趁热抽率，滤液放冷等待析晶，再抽率得到晶体，即盐酸小檗碱纯品。二、薄层色谱鉴定将提取分离出的盐酸小檗碱样品与盐酸小檗碱的对照品共薄层色谱，比较其Rf值是否一致。吸附剂：硅胶G薄层板展开剂：①苯一醋酸乙酯一异丙醇一甲醇一水(6：3：1.5

4、：l.5：0.3)，氨蒸汽饱和。②氯仿-甲醇-氨水(15：8：1)显色剂：改良碘化铋钾试剂1、渗漉前为什么要加入石灰乳搅拌？2.提取时加氯化钠的作用是什么？3、在制备薄层色谱板时有哪些注意事项？第四章芦丁的提取、分离、精制和鉴定1、掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理及操作。2、掌握黄酮苷的水解原理及操作3、掌握黄酮类及糖类化合物的检识。1、碱溶酸沉法提取的原理2、黄酮的检识反应实验七槐米中芦丁的提取实验原理：芦丁结构中具有酚羟基，显酸性，可用碱溶酸沉法提取，碱用石灰水，酸用浓盐酸。实验步骤：称取槐米3

5、0g，在乳钵中研碎，置l000ml的搪瓷杯中，加入300ml饱和石灰水①(以棉花过滤至澄明)加热煮沸30分钟，趁热过滤(以棉花)，残渣再用200ml饱和石灰水煮沸30分钟。趁热过滤，合并两次滤液．加浓盐酸(边加边搅拌)调PH3～4②(放置过夜)次日倾出上清液，抽滤沉淀，蒸馏水洗至PH5～6，70℃干燥，得粗芦丁。注意：①加石灰乳既可以达到碱溶解提取芦丁目的还可以除去槐花米中的多糖类、粘液质等。②酸化时PH过低会使芦丁形成烊盐而降低收率。实验八芦丁的精制、水解及鉴定实验原理：芦丁在水中热溶冷不溶，可用水做

6、溶剂，利用结晶法精制芦丁。一、芦丁（芸香苷）的精制水结晶法：率上次提取液，得芦丁粗品，加蒸馏水300ml，煮沸至芦丁全部溶解，趁热立即抽滤，冷却后即可析出结晶，抽滤，60～80℃烘干，得芦丁精制品。二、芦丁的水解和槲皮素的分离取芦丁1g置500ml圆底烧瓶中加2％H2SO4100ml回流30分钟，(加热约数分钟后，溶液完全澄清，20分钟后又逐渐析出黄色针状结晶)过滤即得槲皮素．必要时用稀乙醇重结晶即可得以含2个分子结晶槲皮素，110℃真空干燥，即可得无水物。滤液：供糖的鉴定。三、化学鉴定取芦丁3～4mg

7、，加乙醇5～6ml使溶解，制成样品溶液A，取槲皮素3～4mg，加乙醇5～6ml使溶解，制成样品溶液B，取芦丁的水解滤液为C，按下列方法进行试验。呈色反应(1)盐酸－镁粉反应取样品溶液A和B各1～2ml，分别加2滴浓盐酸，再酌加少许镁粉，注意观察颜色变化情况。(2)锆盐－枸橼酸反应取样品溶液A和B各1～2ml，分别滴加2％ZrOCl2的甲醇溶液3～4滴。注意观察颜色变化情况，再继续向试管中加入2％枸橼酸的甲醇溶液3～4滴，并详细记录颜色变化情况。(3)a-萘酚反应(Molish反应)取样品溶液Cl～2ml

8、，然后再加10％a-萘酚乙醇溶液2～3滴，摇匀，沿管壁缓缓加入浓硫酸lml，注意观察溶液界面产生的颜色变化。2、薄层色谱鉴别（糖的纸色谱鉴定）点样：取新华一号滤纸，15厘米长，宽度按需要决定。用毛细管点上以下溶液：1、水解浓缩液2、葡萄糖(Rf0.18)对照品溶液3、鼠李糖(RfO.37)对照品溶液展开：用正丁醇一醋酸一水(4：1：5)上行展开。显色：喷苯胺-邻苯二甲酸试剂，于100℃加热5分钟1、简述碱溶酸沉法的原理。2、芸香苷水解时为何