FITC蛋白标记方法.doc

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1、FITC蛋白标记方法1.溶液准备：0.15mol/LNaCl溶液，配法，称取8.775gNaCl溶解于1L水中，0.15mol/LNaHCO3-Na2CO3,PH9.0缓冲液，配法，取（1.59%）Na2CO310ml，（1.26%）NaHCO390ml,调PH到9.02.蛋白溶解液：按V0.15mol/LNaCl：V0.15mol/LNaHCO3-Na2CO3=9:1，溶解蛋白，使蛋白的终浓度为10mg/ml。3.加入荧光素，加入的荧光素的质量按m蛋白：m荧光素=50~80mg:1mg,称取完成后加入事先配好的蛋白溶解液中，于4℃生化培养箱中，摇床混匀过夜。注意加

2、入荧光素后需要避光。4.将混匀后的溶液转移到Millpore超滤管中，超滤管中滤膜可以拦截分子量大于3KD的分子，配平后以5000g的转速于日立高速离心机（型号？）离心至无荧光素滤出为止。大约需离3次，每次离心需2-3h。5.离心结束后，将超滤管中的标记液倒入用锡箔纸包裹的塑料管中，不加叠氮钠于4℃保存。参考文献：MMP-3ContributetoNigrostriatalDopaminergicNeuronalLoss,BBBDamage,andNeuroinflammationinanMPTPMouseModelofParkinson’sDisease.