一种高效的fitc标记lps的方法及其标记效率检测

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1、一种高效的FITC标记LPS的方法及其标记效率检测李宇宁，曹红卫，郑江△，刘鑫，鲁永玲，王艳艳（第三军医大学附属西南医院综合实验研究中心，△为通讯作者）【摘要】目的探索一种高效的荧光素示踪内毒素（LPS）的方法方法将LPS解聚为单体后，加入表明活性剂，在37℃中性溶液中用FITC标记LPS18h，通过截留分子量3000D的Ultra-4超滤离心管将小分子游离的FITC及其它杂质从FITC-LPS中分离纯化，并用荧光分光光度计分别测定标记反应液和纯化后的FITC-LPS溶液的荧光值，将两者进行比较，测定荧光标记率。结果本方法标记的FITC-L

2、PS在激光共聚焦显微镜下能进行良好示踪。经荧光分光光度计检测其标记率为LPS:FITC=1:33.13（mol比值）。结论利用表明活性剂与超滤纯化相结合对LPS进行FITC标记的方法较传统方法效率高，操作简单可靠，为医药学实验中示踪LPS提供了一条有效的途径。【关键词】内毒素；LPS；FITC；标记方法中图法分类R392-3文献标识码：BAnefficientmethodoflabelingfluoresceinisothiocyanatetolipopolysaccharideandthelabelingefficiencydetecti

3、onYuningLi,HongweiCao,JiangZheng△,XinLiu,YonglingLu,YanyanWang(MedicalResearchCentre,SouthwestHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400038,China;△CorrespondingAuthor)【Abstract】ObjectiveTosetupamoreeffectivefluoresceinlabelingmethodtotracelipopolysaccharide.Metho

4、dsLPSwasdisaggregatedintomonomersandthenaddedasurfaceactivator,labeledwithFITCintheneutralsolutionat37℃for18h.TheFITC-LPSwasfurtherpurifiedbyusingaUltra-4milliporefilter.Byexaminationofspectrophotometer,acomparativeanalysisoflabelingefficiencywasperformedbetweenthepurified

5、solutionandtherawsolution.ResultsTheendproductofFITC-LPScanbedetectedeffectivelyunderconfocalmicroscope,expressingfinetaggingability.Thisnewmethodcanreachahigherlabelingrate(withaFITCtoLPSratiobeing33.13:1)thanthetraditionalmethoddoes.ConclusionThenewmethodcombiningthesurf

6、aceactivatorandultra-filtershowsahigherFITC-LPSlabelingefficiency,whichwouldbecomeintoanewapproachfortracingLPSinexperimentalresearch.【Keywords】Endotoxin;Lipopolysaccharide;Fluoresceinisothiocyanate;Labelingmethodology内毒素(endotoxin，ET)是革兰氏阴性细菌细胞壁外膜的组成成分，细菌死亡胞壁裂解后释放。内毒素主要成分

7、为脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)，作为重要的病原体相关分子模式，其诱导脓毒症发生的能力最强，在脓毒症的病理生理中发挥着重要的病理生理作用[1]。LPS与胞膜上其模式识别受体TLR4结合，通过信号转导通路介导炎症细胞活化，其结合机制和分布状态是研究LPS致病机理的重要检测指标之一。越来越多的实验研究需要对LPS进行标记示踪，而商品化荧光标记LPS在本课题组前期研究和国内众多科研单位的应用回馈中效果均很不理想。故本研究主在探讨一种确切有效的LPS荧光标记方法，以解决炎症相关课题研究中示踪LPS的迫切问题。1材料与方法1.

8、1仪器与材料RAW264.7细胞；LPS（055:B5，sigma）；FITC荧光素（sigma）；FITC-LPS（055:B5，LotF8666，sigma）；AlexaFl