HPLC性能检查和参数测定.doc

《HPLC性能检查和参数测定.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、高效液相色谱仪的性能检查和色谱参数的测定一、实验目的1、熟悉高效液相色谱仪性能检查和色谱参数测定的方法2、掌握高效液相色谱仪的一般使用方法二、实验原理1、性能检查：噪音、漂移、定性重复性、定量重复性、检测限；2、色谱参数：理论塔板数（n）、理论塔板高度（H）、有效塔板数（neff），有效塔板高度（Heff），容量因子（k），分配系数比（a），分离度（R）。三、色谱条件色谱仪由岛津10ATvp泵、10ATvp紫外检测器及岛津ODS色谱柱（150×4.6mm，5mm）组成；流动相：甲醇-水（85:15，v/v）；流速：1ml/min；柱温：常温；检测波长：254nm；进样量：定量环20m

2、l。四、实验步骤1、打开计算机、工作站，确认参数；打开泵电源（power），更换流动相，排气，设定流速，开泵（pump）；打开检测器电源，自检完毕后设定检测波长；采集基线，观察噪音和漂移，记录。2、进样一次，出峰完毕后手动停止，保存。重复5~6次。3、打开保存的色谱图，积分处理；打印一副色谱图和所有实验数据，老师审阅后签名。4、关闭检测器，停泵，更换纯甲醇，排气，设定流速0.5ml/min，开泵，关闭工作站、计算机，用纯甲醇分别在Inject和Load位置清洗进样口。5、计算性能指标（灵敏度，检测限，定性、定量重复性）。6、以苯和萘的数据计算色谱参数。五、数据处理要求1、计算公式：，

3、H=L/n，，Heff=L/neff，W=1.699W1/2，，，，灵敏度：，C萘=g/ml，进样量20ml检测限：D（g/ml）=2N/S=，N为噪音（mV）2、数据结果按表中内容填写，对色谱仪和色谱柱性能及参数进行评价。表1HPLC仪性能检查结果123456平均值SRSD（%）t0(min)tR苯(min)tR萘(min)ΔtR(min)A苯（uv.s）A萘（uv.s）A苯／A萘h苯(uv)h萘(uv)W1／2（苯）（S）W1／2（（萘）（S）表2苯和萘的高效色谱参数的测定123456平均值n苯n萘H苯(mm)H萘(mm)neff苯neff萘Heff苯(mm)Heff萘(mm)k

4、苯k萘αRD萘(g/mL)六、思考题1、输液泵使用时有哪些注意事项？2、色谱柱使用时有哪些注意事项？3、为什么要对HPLC仪器的性能指标进行检测？4、分配系数比（分离因子）的意义是什么？其主要影响因素有哪些？5、什么是分离度？如何提高分离度？