仪器分析教程 教学课件 作者 陈集 朱鹏飞 主编 第10章 高效液相色谱法－仪分教程10.2 高效液相色谱仪.ppt

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1、仪器分析教程第10章高效液相色谱法10.2概述HighPerformanceLiquidChromatography（HPLC)10.2.1高压输液系统10.2.2进样系统10.2.3分离系统10.2.4检测系统2021/10/710.2高效液相色谱仪液相色谱仪器2021/10/710.2高效液相色谱仪液相色谱仪器2021/10/710.2高效液相色谱仪液相色谱仪器2021/10/710.2高效液相色谱仪液相色谱仪器2021/10/710.2高效液相色谱仪2021/10/710.2高效液相色谱仪高效液相色谱仪主要由高压输液系统、进样系统、分离系统、检测和记录系统四大部分组成。HPLC流程

2、示意图2021/10/710.2高效液相色谱仪10.2.1高压输液泵HPLC主要部件之一，为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。高压输液泵主要由贮液器、高压泵、过滤器、梯度洗脱装置等组成。2021/10/710.2高效液相色谱仪10.2.1高压输液泵（1）贮液器一般由玻璃、不锈钢或聚四氟乙烯制成，容量为1～2L。贮液器应带有脱气装置。2021/10/710.2高效液相色谱仪10.2.1高压输液泵（2）高压泵一般要求泵的输出压力高达15～50Mpa。①恒压泵：输出的压力恒定，而流量则随色谱系统阻

3、力的变化而变化，不适于梯度洗脱，②恒流泵：在一定的操作条件下，输出的流量恒定，柱阻力或流动相黏度改变只引起柱前压力的变化，特别适合梯度洗脱。2021/10/710.2高效液相色谱仪外梯度:利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。内梯度:一台高压泵,通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。10.2.1高压输液泵（3）梯度洗脱装置2021/10/710.2高效液相色谱仪10.2.1高压输液泵梯度洗脱装置示意图2021/10/710.2高效液相色谱仪10.2.2进样系统（1）注射器进样2021/10/710.2高效液

4、相色谱仪10.2.2进样系统流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置，其结构如图所示：（2）六通阀进样2021/10/710.2高效液相色谱仪10.2.2进样系统（3）自动进样器可自动进样、适合大量样品的分析、实现自动化。2021/10/710.2高效液相色谱仪10.2.3分离系统柱体为直型不锈钢管，内径1～6mm，柱长5～40cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。2021/10/710.2高效液相色谱仪10.2.4检测系统1.紫外检测器原理：基于待测组分对特定波长紫外光的选择性吸收，组分浓度与吸光度的关系服从比耳定律。特点：灵敏度高；线形范围高；流通池很小（容积8

5、μL）；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。应用最广，对大部分有机化合物有响应。2021/10/710.2高效液相色谱仪紫外检测器的重要进展：光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。2021/10/710.2高效液相色谱仪10.2.4检测系统2.荧光检测器高灵敏度、高选择性；对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应；2021/10/710.2高效液相色谱仪10.2.4检测系统3.电导检测器原理：基于被测组分的导电能力的不同，它对温度和载液流速较敏感，是离

6、子交换色谱中使用最广泛的检测器。2021/10/710.2高效液相色谱仪10.2.4检测系统4.示差折光检测器原理：基于被测组分和流动相的折光率的不同，特点：该检测器为通用型检测器（每种物质具有不同的折光指数），是除紫外检测器之外应用最多的检测器。其灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱类型：偏转式、反射式和干涉型三种。2021/10/710.2高效液相色谱仪10.2.4检测系统4.示差折光检测器类型：偏转式、反射式和干涉型三种。2021/10/7Thanks2021/10/7