燕麦散黑穗病菌冬孢子萌发条件研究.doc

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1、燕麦散黑穗病菌冬胞子萌发条件研究摘要：为明确燕麦散黑穗病菌(Ustilagoavenae)冬抱子在自然生境中的萌发条件，研究了疏亲水界面、不同温度、湿度、光照时间、pH、碳源和氮源对冬抱子萌发的影响。结果表明，亲水界曲促进冬抱子萌发，在水琼脂培养基上萌发率最高；冬抱子萌发的最适温度为20〜25°C,温度过高或过低均抑制其萌发。冬抱子对湿度要求较高，RH390%时才可萌发，且萌发率较低。光照对冬抱子萌发的影响不明显，酸性条件有利于冬孑包子萌发，最适pH为4〜7,葡萄糖和蛋片月东可促进冬抱子萌发。关键词：燕麦散黑穗病菌；冬抱子；萌发条件中图分类

2、号：S435.126文献标识码：A文章编号:10095500(2014)02003306燕麦散黑穗病病菌(Ustilagoavenae)以厚垣抱子附着在燕麦种子表面或以菌丝潜伏在种了与颖売Z间甚至种皮内越冬，引起初侵染，土壤和肥料传播的可能性较小［5］。目前，燕麦散黑穗病已成为当前严重影响其产量和品质的主要病害，甚至成为了一种毁灭性病害。冬抱子能否良好地萌发是该病害能否发生的关键，了解其在自然环境中的萌发适宜条件，在燕麦生产中尽量避免为其散黑穗病菌冬抱子萌发提供相适应的条件，可有效防止该病害的发生。燕麦冠锈、叶锈及白粉病等均被大量研究［6］

3、,但是，该病害病原菌冬抱子萌发条件报道较少。通过测定燕麦散黑穗病菌冬抱子在不同条件下的萌发率，确定其萌发条件，可为该病害科学防治提供理论基础。1材料和方法1.1材料供试燕麦散黑穗病菌冬抱子由廿肃省农业科学院甘谷试验站提供。1.2方法1.2.1冬抱子悬浮液配制与抱子萌发统计挑取少量燕麦散黑穗病菌冬砲子粉加入适量无菌蒸镭水，振荡摇匀、使抱子团充分散开即制得冬抱子悬浮液。冬砲子悬浮液浓度控制在低倍镜下可见病菌抱子数100o冬抱子萌发统计方法采用显微镜下检查，淡黄色为未成熟的冬抱子，不能萌发，不予统计。以芽管长度超过冬抱子直径1/2作为其萌发标准［

4、7］。每时间段各处理检查至少200个以上冬抱子［9］。1.2.2疏亲水界面对冬抱子萌发的影响用移液枪取冬抱子悬浮液，分别置于疏水（灭菌载玻片、燕麦叶片正面）、亲水（含有水琼脂培养基的表面、湿润的滤纸）界面上，标记接菌点，置于25°C培养箱中培养。分别于4,8,12,24h后镜检冬抱子萌发情况，计算萌发率，每处理3次重复。冬抱子萌发率（％）二［冬抱子萌发数/（冬抱子萌发数+未萌发抱子数）］X100%［10］o1.2.3温度对冬他子萌发的影响将配制的冬抱子悬浮液分别置于0、5、10、15、20、25、30、35、40°C恒温下保湿培养，分别于第

5、4,8,12,24h后在显微镜下观察记录冬抱子萌发情况，每处理重复3次。1.2.4湿度対冬孑包子萌发的影响用无菌水将冬抱子粉制成冬抱子悬浮液，置于载玻片上自然风干，置于相对湿度（RH）为40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%和100%的恒温箱中25°C恒温培养，4,8和12h后镜检冬抱子萌发情况，每处理重复3次。1.2.5光照对冬抱子萌发的影响将冬抱子粉制成的抱子悬浮液悬滴于水琼脂平板上，在25°C下以日光灯模拟自然光连续光照、连续黑暗、光暗交替各12h,光照8h黑暗16h,光照16h黑暗8h,培养24h后，镜检各处理他子萌

6、发情况，每处理重复3次。1.2.6pll对冬砲子萌发的影响用磷酸二氢钾和磷酸氢二钠配制PH4、5、6、7、8、9的缓冲溶液，再以此溶液分别配制成对应pH的冬抱子悬液，将各处理冬抱子悬液悬滴于水琼脂培养基上，置于25°C恒温培养箱中培养，分别于第4,8和12h后镜检冬抱子萌发情况，每处理重复3次[ll]o1.2.7碳、氮源对冬抱子萌发的影响用6种碳源（1%蔗糖、1%葡萄糖、I%D木糖、1%甘露醇、1%可溶性淀粉、1%麦芽糖）和6种氮源（1%乙酸钱、1%氯化钱、1%甘氨酸、1%尿素、1%蛋白月东、1%硫酸鞍）溶液制备冬抱子悬浮液，以无菌水为对照

7、。将各处理冬抱子悬液悬滴于水琼脂培养基上，置于25°C恒温培养箱中培养，12h后镜检冬砲子萌发情况，每处理重复3次。2结果与分析2.1冬抱子及冬孑包子萌发形态燕麦散黑穗病菌冬抱子团黑褐色，冬抱子（图1A）球形或近球形，橄榄褐色。冬抱子萌发以直接产生芽管（图1B）为主，常有分枝（图1C）,在萌发时可以产生次生小抱子。图1燕麦散黑穗病菌冬抱子形态（A）及萌发形态（B、C）Fig.1Morphologyofteliospores（A）andgerminatingteliospores（B、C）ofUstilagoavenae注：A.冬抱子（10X

8、40）；B.冬抱子4h时萌发状态（10X40）；C・冬孑包子12h时萌发状态（10X40）2.2疏亲水界曲对燕麦散黑穗病菌冬抱了萌发的影响散黑穗病菌冬砲子在燕麦叶片和滤纸上均不能