细胞培养技术 教学课件 作者 兰容 周珍辉 主编 章静波 主审 理论部分8植物愈伤组织培养.ppt

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1、第八章植物愈伤组织培养1、愈伤组织愈伤组织（callus）,原指植物在受伤之后于伤口表面形成的一团薄壁细胞．组织培养中，则是指在人工培养基上由外植体组织的增生细胞产生的一团不定形的疏松排列的薄壁细胞．一、基本概念2、愈伤组织培养是指将母体植株伤的特定部分切下，形成外植体，接种到无菌的培养基上，进行愈伤组织诱导、生长和发育的一门技术。愈伤组织培养是植物组织培养最常见的培养形式，除茎尖分生组织和一部分器官培养以外，其他几种植物组织培养形式最终都要经历愈伤组织才能形成再生植株．愈伤组织还常常是悬浮培养的细胞和原生质体的

2、来源．由外植体形成愈伤组织，标志着植物组织培养的开始．二、愈伤组织形成过程诱导期(inductionstage)，通过一些刺激因素和激素（很多情况下单独使用2，4－D就可成功诱导愈伤组织的发生）的诱导作用，使接种的外植体的合成代谢加强，迅速积累蛋白质和核酸．分裂期(divisionstage)，顾名思义是指经诱导后，外植体开始迅速分裂，结构疏松，个体小，缺少组织结构，生理生化都发生变化．形成期(formationstage)，是指经诱导、分裂后，形成了无序结构的愈伤组织的时期．三、植物愈伤组织培养的具体过程1、准

3、备工作接种工具的准备：镊子（直头、弯头）；解剖剪（直头、弯头）；解剖刀；接种铲培养容器的准备：三角瓶；培养皿2、培养基的配制培养基的选择对成功地进行植物组织培养至关重要。愈伤组织的诱导一般采用固体培养基。配制时多采用母液法，以MS和B5两种培养基应用最广。3、外植体的制备（1）外植体的选择1）外植体的部位：植物体的各个部位几乎都可作为愈伤组织培养的外植体，但有些部位较难脱分化，对大多数植物来说，常用以下部位作外植体：茎尖：较好，但来源受限。一般来说顶芽比侧芽好。茎段：叶片2）取材季节：应在生长开始的季节采样，如苹

4、果芽3～6月取材，成活率60％以上；7～11月取材，成活率10％。（2）外植体的消毒植物材料用流水冲洗干净（10min），对难以洗净（表面不光滑、长有绒毛）的材料，要冲洗1～2h，然后用洗衣粉或洗涤剂溶液洗涤（必要时用毛刷充分刷洗），再用大量水冲洗，最后一遍用蒸馏水冲洗，再用无菌纱布或滤纸将材料上的水分吸干。在无菌环境中将材料放入70％酒精中浸泡30s～60s,无菌水冲洗3～4次。再将材料移入0.1％～0.2％升汞溶液（10～15min）或次氯酸钠溶液（5～30min）中消毒。注：消毒时间长短，消毒剂浓度高低视材

5、料而定取出后用无菌水冲洗3次以上（特别是升汞消毒时应不少于5次），无菌滤纸吸干，备用。（3）外植体的切割一般将外植体切割成0.5cm×0.5cm的大小，叶片则为0.5cm（4）接种和培养接种：将消过毒的外植体在无菌体下直接放在培养基表面或插入培养基中即可。茎尖、茎段等基部插入固体培养基中，叶片通常叶背面接触培养基。培养：温度：23～27度；光照条件：一般用40W日光灯，日光灯的距离为20cm，日光灯距样品40cm；湿度70～80％；氧：必需，因此避免把整个外植体全部埋入琼脂。（5）定期观察有无污染，培养物的形态学

6、变化四、愈伤组织的继代培养一般在愈伤组织长到２厘米多的一团时，才将其与外植体分离，单独培养，并分为４～８块继续培养，这就是继代培养．由于培养基的营养、水分等条件的限制，必须将愈伤组织转移到新鲜的培养基上进行继续培养．由于代谢产物的积累会产生毒害作用，如果长时间不继代培养，就会使愈伤组织变为黑褐色，称为褐化．作业：什么是愈伤组织培养？它在植物组织培养中具有什么意义？愈伤组织的形成要经历哪些过程？简述愈伤组织培养的具体过程及其注意事项。