药理实验14 动物体内磺胺药浓度的测定-课件.ppt

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1、实验十四动物体内磺胺药浓度的测定【实验目的】掌握磺胺类药物在动物血液中浓度测定的方法—重氮化偶合比色测定法。【测定原理】具有伯胺的磺胺药在酸性介质中与亚硝酸发生重氮化反应后，可与N-(1萘基）乙二胺产生偶合反应生成紫红色偶氮染料，不同浓度的磺胺生成的颜色有差异，与同样处理的已知浓度的磺胺药标准液比较，即可求得磺胺药的含量。剩余的亚硝酸影响测定，用氨基磺酸胺分解除去。磺胺重氮盐N-(1萘基）乙二胺磺胺类药物+亚硝酸---→重氮盐+N-(1萘基）乙二胺→紫红色【实验材料】药物：10%磺胺嘧啶钠注射液（安剖瓶，注射用）。试剂：15%三氯醋酸溶液；0.1%亚硝酸钠溶液；0.5%氨基磺酸胺溶液；0

2、.1%二盐酸N-(1萘基)-乙二胺溶液；磺胺嘧啶钠标准工作液(100mL试剂瓶，比色用)。【试剂的配制】0.1%二盐酸N-(1萘基)-乙二胺溶液：0.5g溶于95%乙醇约400mL中，再用乙醇稀释至500ml，棕色瓶于冰箱中保存标准贮存液：取磺胺嘧啶钠标准品0.1g溶于(10%磺胺嘧啶钠注射液1ml)蒸馏水中，并稀释至1000mL。标准工作液:精确吸取贮存液5mL，置100mL容量瓶中，用3%三氯醋酸稀释至刻度。仪器：721分光光计、注射器、烧杯、试管、漏斗等。实验动物：兔。【仪器与动物】【实验步骤】每组取家兔1只，称重，固定，采集血液。空白对照液采空白血0.5mL，放入加有15.5mL

3、蒸馏水的试管中，混匀，放置15min。再加15%三氯醋酸4mL，混匀，放置2min，过滤。血液样本：单剂量耳静脉注射（100mg/kg,1mL）10%磺胺嘧啶钠溶液。采样时间：静脉注射后5、15和30min。各时间点血样0.5mL，加到15.5mL蒸馏水中，混匀，放置15min。再加15%三氯醋酸4mL，混匀，放置2min，过滤。样本处理取试管5支：1支试管加入空白对照液5mL，为空白管；三支分别加入三个时间点的滤液5mL，为测定管；1支试管，加入应用标准液5mL，为标准管。每个试管中加入0.1%亚硝酸钠溶液0.5mL，混匀，放置3min。每个试管中加入0.5%氨基磺酸胺溶液0.5mL，

4、混匀，放置2min。每个试管中加入0.1%二盐酸N-(1萘基)-乙二胺溶液2.5mL，充分混匀，放置10min。样本测定偶氮化合物的吸光度与磺胺药物浓度成正比用721分光光度计在550nm波长处比色，以空白管校正光密度到0点，读取标准管和测定管光密度，计算游离磺胺药物含量。分光光度计拿比色皿时，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，不要碰比色皿的透光面，以免沾污。清洗比色皿时，一般先用水冲洗，再用蒸馏水洗净。每次做完实验时，应立即洗净比色皿。测定有色溶液吸光度时，一定要用有色溶液洗比色皿内壁几次，以免改变有色溶液的浓度。磺胺药物浓度=×应用标准液浓度×样品稀释倍数【计算公式】结果记录管号血液体积

5、（ml）吸光度值浓度(μg/ml)空白管标准管5min15min30min