粉尘螨1类变应原T和B细胞表位嵌合基因的构建、表达及特异性免疫治疗研究.pdf

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1、分类号：单位代码：安这工犬學论文题目：粉尘螨类变应原和细胞表位嵌合基因的构建、表达及特异性免疫治疗研究作者姓名：徐海丰专业名称：病原生物学导师姓名：王克霞教授完成时间：二—五年六月中图分类号：论文编号学科分类号：密级：公开安徽理工大学硕士学位论文粉尘螨类变应原和细胞表位嵌合基因的构建、表达及特异性免疫治疗研究资助项目：国家自然科学基金（作者姓名：徐海丰专业名称：病原生物学研究方向：感染性疾病导师姓名：王克霞教授导师单位：安徽理工大学答辩委员会主席：方严论文答辩日期：年月日安徽理工大学研究生院年月日ADiss

2、ertationinPathogenBiologyConstructionandexpressionofachimericgenewithT-/B-cellepitopesfrommajorallergengroup1dustmitesandstudyontheireffectivenessforallergen-specificimmunotherapyThisworkwassupportedbyNationalNaturalScienceFoundationofChinaNo.81270091Candi

3、date:XuHaifengSupervisor:WangKexiaMedicalSchoolAnHuiUniversityofScienceandTechnologyNo.168，，，独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方以外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽理工大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学

4、位论文作者签名：日期：⑷年月曰学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解安徽理工大学有保留、使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属于安徽理工大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权安徽理工大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以釆用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：樣族寺签字日期：憤年月一日导师签名签字日期：办丨年月日摘要摘要目的：

5、构建编码粉尘螨类变应原（的细胞表位与细胞表位嵌合基因原核表达载体，并进行大规模表达纯化，以及探宄重组变应原的特异性免疫治疗效果。方法将所包含的个细胞表位（与个细胞表位（，按照和连接方式，直接合成表位嵌合基因，并分别命名为和。构建原核表达重组质粒和通过经限制性内切酶进行双酶切鉴定，并在测序验证的阳性后，克隆转化到中进行诱导表达。分析各表达的产物并纯化，同时利用进行鉴定验证。检测法检测各表达的嵌合蛋白对粉尘螨过敏患者的血清抗体的结合力。动物实验：把只小鼠随机分为：组：阴性对照组、组：哮喘组、组：治疗组、组：重组

6、融合变应原治疗组、组：重组融合变应原治疗组等组。其中哮喘组、治疗组、治疗组和治疗组小鼠用粉尘螨提取液于第、、进行次腹腔注射致敏，并于第开始行雾化吸入激发，持续。其中治疗组于雾化吸入前分钟，分别用、进行特异性免疫治疗。对照组用磷酸盐缓冲液（进行腹腔注射及雾化吸入。完成雾化吸入激发实验后，分别进行：计数支气管肺泡灌洗液（中白细胞总数观察肺组织病理切片；检测与脾细胞培养上清液（中、；血清中特异性、水平。结果双酶切及测序的结果表明，成功构建了原核表达重组质粒与分析表明，与成功诱导，并纯化成功。的结果进一步证实纯化了

7、和的嵌合蛋白。同时进行了大规模的纯化。与相比，发现与嵌合蛋白和粉尘螨过敏患者的血清抗体的结合能力显著降低但是与之间差异无统计学意义（〉。用和嵌合蛋白分别对粉尘螨粗提取液致敏的小鼠哮喘模型进行特异性免疫治疗后，经法检测，结果表明：组、和组小鼠的肺部炎症比哮喘组明显减轻。组、与组小鼠肺泡灌洗液中白细胞总数和嗜酸性粒细胞数均明显降低，但组与组、组相比，没有明显的差异（尸。摘要法检测的各组小鼠与中的了与水平，结果显示：组、组、组和哮喘组比较，和中含量则显著升高，的水平明显降低，组、组、组之间差异无统计学意义（。组、

8、组、组血清中变应原特异性抗体的浓度降低显著（组、组、组之间差异无统计学意义（〉。浓度则显著升高（组、组、组之间差异无统计学意义（〉。结论成功表达了的和细胞的表位嵌合蛋白，同时进行了大规模纯化；所表达的嵌合蛋白成功通过对尘螨过敏性哮喘模型的小鼠进行治疗，且在一定程度上可有效减轻哮喘模型的小鼠的肺部炎症。粉尘螨类变应原的小分子低毒过敏原构建成功，为诊断和治疗过敏性哮喘奠定基础。图表参关键词：尘螨类变应原；重组变应原；