酵母双杂交鉴定FAK与TSC2作用的功能域及TSC2磷酸化位点鉴定.pdf

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2、奇掌■、巧六；汽酵巧双杂交鉴定ＦＡＫ与ＴＳＣ２你用的■＇－■＇—－ｖ＇、＇Ｖ．一■；、．■＇、Ｖ巧能域及ＴＳＣ２ｉｉ化位点鉴定—．．、．．；．：务．．＇．ｖ拉Ｖ：；努終ｉ，：，＇．Ｓ藤載琴转＇備：嘴寒雙‘■？—：游．？■硏究方向：麵互汇．……：……—？．１５遲漏＇—詳．．挤巧為Ｖ灣拍雙藏封成攀；３１３０８０４９学校代码：１０１２６学号：分类号：编号：论女题目酵母双杂交鉴定ＦＡＫ与ＴＳＣ２作用的功能域及ＴＳＣ２磯酸化位点鉴定学院；生命科学学院专业：微生物研究方向

3、：基因工程姓名；姚眷原指导教师；王志钢教授２０１６年５月３０曰原创性声明本人声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下进行的研究１作及取得的研究成果，。除本文已经注明引用的内容外论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得内蒙古大学及其他教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：聲森反指导教师签名：＾日期：日期：在学期间研巧：成果使用承诺书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，目Ｐ；内蒙古大

4、学有权将学位论文的全部内容或部分保留并向国家有关机构、部口送交学位论文的＾复印件和磁盘，允许编入有关数据库进行检索，也可文采用影印、缩印或其他复制手段保存，、汇编学位论文。为保护学院和导师的知识产权作者在学期间取得的研。究成果属于内蒙古大学作者今后使用涉及在学期间主要研究内容或研究成果，须征得内蒙古大学就读期间导师的同意；若用于发表论文，版权单位必须署名为内蒙古大学方可投稿或公开发表。、学位论文作者签名：推兔货指导教师签名：＾日期：：日期酵母双杂交鉴定ＦＡＫ与ＴＳＣ２作用的功能域及ＴＳＣ２踞酸化位点鉴定摘要一粘附斑激酶（Ｆｏｃ

5、ａｌａ地ｅｓｉｏｎｋｉｎａｓｅＦＡＫ）是种胞质非雙体酪氨酸激酶，，、、、、是整合素调节信号通路重要的调节因子，在细胞的迁移粘附侵入分化肿涵干细胞的增殖与分化和肿瘤微环境形成等方面起着至关重要的作用。ＴＳＣ１／２合体（ｔｈｅｔｒｌｅｘ１／２）由ＴＳＣ１和ＴＳＣ２组复ｉｍｅｒｉｃＵｉｂｅｒｏｕｓｓｃｌｅｒｏｓｉｓｃｏｍｐ一成，是个汇聚细胞内外多种信号的中也节点，对胞外有丝分裂原和生长因子，胞内能量水平，ｍＴＯＲＣｌ（Ｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃｔａｒｅｔｏｆ、氧分压等作出回应调节ｇｒａａｍｃｉｎｃｏｍｌｅｘｌ）通路活性。ｍＴＯＲ是非典

6、型性的Ｓｅｒ／Ｔｈｒ激酶，在细胞内ｐｙｐ与其它蛋白形成两个不同的复合体ｍＴＯ民Ｃ１和ｍＴ０ＲＣ２而发挥作用。ｍＴＯＲＣｌ一是细胞生长和代谢过程中个重要的调节枢纽，积极调控蛋白质合成和其他代谢过程的多个方面‘。我们前期的研究显示ＦＡＫ与ＴＳＣ２具有相互作用关系，ＦＡＫ可能通过ＴＳＣ２调Ｏ民Ｃ一控ｍＴ１活性。为了进步研究ＦＡＫ与ＴＳＣ２么间的相互作用机制，我们人巧３Ｔ细胞为材料，首先利用酵母双杂交技术确定ＦＡＫ与ＴＳＣ２相互作用的具体功能域；次之利用ＲＮＡ干扰和基因过表达技术研究细胞内Ｆ乂？＾基因表达后沉默及过表达对ｍＴＯ民信号通路中ｍＴＯＲ、％和４Ｅ

7、ＢＰ１的活性影响情况，确定ＦＡＫ对ｍＴＯ民通路的调控作用，将人仍（於；接着基因和颗Ｃ２基因共转到ＩＩ到酵母细胞中过表达，用免疫巧沉淀技术确定ＦＡＫ和ＴＳＣ２在酵母中同样发生相互作用；最后，为了检测ＴＳＣ２受ＦＡＫ作用后发生变化的磯酸化位点，利用Ｃ２ＴＳＣ２单一真核诱导表达技术诱导ＴＳ在酵母内大量表达，分离蛋白，利用质谱进行憐酸化组检测。：１ＳＣ２实验结果显示．酵母双杂交实验表明ＦＡＫ和Ｔ具有相互作用关系，－－－ｒｔ全长ＦＡＫ的Ｃ末端片段