临床生物化学检验常用技术ppt课件.ppt

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1、临床生物化学检验常用技术第三章1本章主要内容第一节光谱分析技术第二节电化学分析技术第三节干化学分析技术第四节电泳分析技术第五节基因扩增技术2教学目标和要求掌握1.光谱分析技术的基本原理及定性和定量方法。2.电位分析法的概念，离子选择性电极的结构及类型。3.基因扩增技术的原理、反应体系的组成及注意事项。熟悉：影响光谱分析技术、电泳技术的因素各种分析技术在生化检验中的应用。3第一节光谱分析技术本节主要内容一、光谱分析技术的基本原理二、光谱分析技术在临床生物化学检验中的应用补充：分光光度计的基本结构、操作方法4一、光谱分析技

2、术的基本原理：利用各种化学物质都具有发射、吸收或散射光谱谱系的特征，以此来确定物质性质、结构或含量。光谱分析技术分类：发射光谱分析技术：火焰光度法、原子发射光谱法和荧光光谱法吸收光谱分析技术：紫外、可见光分光光度法，原子吸收分光光度法和红外光谱法散射光谱分析技术：比浊法5（一）分光光度技术的基本原理1.吸光度与透光度A=-lgT=-lgI/I0=lgI0/I当时，一部分光被散射；一部份光被吸收；另有一部分光透过溶液。设入射光强度为I0，透射光强度为I，I和I0之比称为透光度，表示透过光强度与入射光强度的比值即：T=I/I

3、0T×100为T%称为百分透光度。透光度的负对数称为吸光度即：光线通过溶液6完全吸收完全透过吸收黄色光光谱示意表观现象示意复合光7朗伯-比尔定律：I0：入射光强度C:溶液浓度b:液层厚度I:透射光强度T:透光度A:吸光度k:吸光系数bI0I2.Lambert-Beer定律8Lambert-Beer定律是讨论溶液吸光度同溶液浓度和溶液层厚度之间关系的基本定律，该定律是分光分析的理论基础。其表达式为：A=KLC式中A为吸光度；K为比例常数，称为吸光系数；L为溶液层厚度，称为光径；C为溶液浓度（Lambert-Beer定律适用

4、于可见光、紫外光、红外光和均匀非散射的液体。）表示：吸光度与和溶液中吸光物质的浓度C和溶液的厚度L的乘积成正比。9当溶液浓度C的单位为g/L，溶液液层厚度L的单位为cm时，K叫“吸光系数”，用а表示。其单位为L/g·cm当溶液浓度C的单位为mol/L，溶液液层厚度L的单位为cm时，K叫“摩尔吸光系数”，用ε（êpsilon）表示。其单位为L/mol·cm，此时：A=εLCε的意义是：当液层厚度为1cm，物质浓度为1mol/L时在特定波长下的吸光度值。10ε是物质的特征性常数。摩尔吸光系数越大，表示物质对波长为λ的光的吸收

5、能力越强，同时在分光光度法中测定的灵敏度也越大。吸光系数大小取决于吸光物质的性质、入射光的波长及温度。（1）物质不同，吸光系数不同。属于物质的特征常数。（2）溶剂不同，同一物质吸光系数也不同。（3）光波长不同，吸光系数不同。11吸收定律的适用条件：①必须是使用单色光为入射光；②溶液为稀溶液；③吸收定律能够用于彼此不相互作用的多组分溶液。吸光度的加和性：A总=A1+A2+A3…+An溶液中有多种吸光物质时，总吸光度等于各吸光物质吸光度总和。12（二）原子吸收分光光度法（AtomicAbsorptionSpectrometr

6、y,AAS）基本原理：根据待测元素的气态原子，能吸收同种原子所发射的特征光辐射，吸收特征符合Lambert-beer定律，即一定条件下，原子的吸光度同待测元素基态原子的浓度成正比，计算出试样中待测元素的含量，这种方法称为原子吸收光谱法。13四大部分组成：光源、单色器、原子化器、检测器。141.选择性高，干扰少。共存元素对待测元素干扰少，一般不需分离共存元素。原子吸收分光光度法特点：2.灵敏度高。火焰原子化法：10-9g/mL；石墨炉：10-13g/mL。3.测定的范围广。测定70多种元素。4.分析速度快。5.精密度、准确

7、度高。火焰法误差<1%，石墨炉法3%-5％。15原子吸收分光光度法与紫外可见吸收光度法异同点相同点：1）都是依据样品对入射光的吸收进行测量的。2）两种方法都遵循朗伯-比耳定律。3）就设备而言，均由四大部分组成，即光源、单色器、吸收池（或原子化器）、检测器。161.在可见、紫外分光光度法中，吸光物质是溶液中被测物质的分子或离子对光的选择吸收，原子吸收光谱法吸光物质是待测元素的基态原子对光的选择吸收，这种光是由待测元素制成的空心阴极灯(称元素灯)作光源。2.单色器与吸收池的位置不同。紫外可见：光源→单色器→比色皿。原子吸收：

8、光源→原子化器→单色器。异同点：17二、光谱分析技术在临床生物化学检验中的应用（一）分光光度技术的定性方法定性依据：最大吸收波长λmax和摩尔吸光系数ε2.摩尔消光系数ε方法1.最大吸收波长λmax方法确定是什么物质18（二）分光光度技术的定量方法1.标准曲线法根据Lambert-Beer定律，液体的浓度在一定范围内