生产菌种的扩大培养与保藏.doc

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1、生产菌种的扩大培养与保藏生产菌种的扩大培养与保藏目前工业规模的发酵罐容积已达到几十立方米或几百立方米。如按百分之十左右的种子量计算，就耍投入几立方米或几十立方米的种子。要从保藏在试管中的微生物菌种逐级扩大为生产用种子是一个由实验室制备到车间生产的过程。其生产方法与条件随不同的生产品种和菌种种类而异。如细菌、酵母菌、放线菌或霉菌生长的快慢；产抱子能力的大小；及对营养、温度、需氧等条件的要求均有所不同。因此,种子扩大培养应根据菌种的生理特性，选择合适的培养条件来获得代谢旺盛、数量足够的种子。这种种子接入发酵罐后，将使发酵生产周期缩短，设备利用率提高。种子液质量的优劣对发酵生产起着关键性的作用。

2、种子扩大培养：是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，在经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级放大培养而获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。发酵工业生产过程中的种子的必须满足以下条件：（1）菌种细胞的生长活力强，移种至发酵罐后能迅速生长，迟缓期短；（2）生理形状稳定；（3）菌体总量及浓度能满足大容量发酵罐的要求；（4）无杂菌污染；（5）保持稳定的生产能力。第一节种子的制备过程在发酵生产过程中，种子制备的过程大致可分为两个阶段：（1）实验室种子制备阶段（2）生产车间种子制备阶段一、实验室种子的制备实验室种子的制备…般采用两种方式：对于产抱子能力强的及抱

3、子发芽、生长繁殖快的菌种可以采用I古I体培养基培养抱子，抱子可直接作为种子罐的种子，这样操作简便，不易污染杂菌。对于产砲子能力不强或砲子发芽慢的菌种，可以用液体培养法。(%1)抱子的制备1,细菌孑何子的制备细菌的斜面培养基多釆用碳源限量而氮源丰富的配方。培养温度…般为37°Co细菌菌体培养吋间…般为广2天，产芽抱的细菌培养则需要5~10天。2,零菌抱子的制备零菌抱子的培养一般以大米、小米、玉米、麦夫皮、麦粒等天然农产晶为培养基。培养的温度一般为25〜28°C。培养时间一般为4〜14天。3,放线菌鞄子的制备放线菌的抱子培养一般采用琼脂斜面培养基，培养基中含有一些适合产抱子的营养成分，如鉄皮、

4、豌豆浸汁、蛋口月东和一些无机盐等。培养温度一般为28°Co培养时间为5~14天。(%1)液体种子制备1,好氧培养对于产抱子能力不强或抱子发芽慢的菌种，如产链霉素的灰色链霉菌(S.griseus)＞产卡那霉素的卡那链霉菌(S.Kanamuceticus)可以用摇瓶液体培养法。将抱子接入含液体培养基的摇瓶中，于摇瓶机上恒温振荡培养，获得菌丝体，作为种子。其过程如下：试管f三角瓶f摇床f种子罐1,厌氧培养对于酵母菌（啤酒，葡萄酒，清酒等），其种子的制备过程如下：试管f三角瓶一卡式罐一种子罐例如生产啤酒的酵母菌一般保存在麦芽汁琼脂或MYPG培养基（培养基配制：3克麦芽浸出物，3克酵母浸出物，5克蛋

5、口豚，10克葡萄糖和20克琼脂与升水中）的斜面上，于JC冰箱内保藏。每年移种3-4次。将保存的酵母菌种接入含10ml麦芽汁的500-1000ml三角瓶中，再于25°C培养2-3天后，再扩大至含有250-500ml麦芽汁的500-1000ml三角瓶中，再于25°C培养2天后，移种至含有5-10L麦芽汁的卡氏培养罐中，于15-20°C培养3-5天即可作100L麦芽汁的发酵罐种子。从三角瓶到卡氏培养罐培养期间，均需定时摇动或通气,使酵母菌液与空气接触，以有利与酵母菌的增殖。二、生产车间种子制备实验室制备的抱子或液体种子移种至种子罐扩大培养，种子罐的培养基虽因不同菌种而异，但其原则为釆用易被菌利用

6、的成分如葡萄糖、玉米浆、磷酸盐等，如果是需氧菌，同时还需供给足够的无菌空气，并不断搅拌,使菌（丝）体在培养液中均匀分布,获得相同的培养条件。1,种子罐的作用：主要是使抱子发芽，生长繁殖成菌（丝）体，接入发酵罐能迅速生长,达到•定的菌体量，以利于产物的合成。2,种子罐级数的确定种子罐级数：是指制备种子需逐级扩大培养的次数，取决于：（1）菌种生长特性、抱子发芽及菌体繁殖速度；（2）所采用发酵罐的容积。比如：细菌：工长快，种子用量比例少，级数也较少，二级发酵。茄子瓶f种子罐f发酵罐霉菌：生长较慢，如青霉菌，三级发酵抱子悬浮液-＞一级种子罐（27°C,40小时抱子发芽，产生菌丝）-二级种子罐（27

7、°C,10、24小吋，菌体迅速繁殖，粗壮菌丝体）一发酵罐放线菌：生长更慢，采用四级发酵酵母：比细菌慢，比霧菌，放线菌快，通常用一级种子1,确定种子罐级数需注意的问题（1）种子级数越少越好，可简化T艺和控制，减少染菌机会（2）种子级数太少，接种量小，发酵时间延长，降低发酵罐的牛产率，增加染菌机会（3）虽然种子罐级数随产物的品种及生产规模而定。但也与所选用工艺条件有关。如改变种子罐的培养条件，加速了砲子发芽及菌体的繁殖，也可