嗜水气单胞菌群体感应系统对其生物学特性的调控研究.pdf

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5、￥；分类号：Q93-3单位代码：10152密级：公开学号：13107100002022大连工业大学硕士学位论文中文题目：嗜水气单胞菌群体感应系统对其生物学特性的调控研究英文题目：RegulationofAeromonashydrophilaquorumsensingsystemonitsbiologicalcharacteristics学科名称：生物学隶属学院：生物工程学院研究生：崔一指导教师:祖国仁教授陈明副教授2016年6月摘要摘要嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)是自然界中广泛存在的一种革兰氏阴性菌，是一种典

6、型的人-兽-鱼共患病病原菌，该菌中存在着以AHL为信号分子的群体感应系统（Quorumsensing,QS）1和以AI-2为信号分子的群体感性系统2（QS2）两种群体感应系统，其中，ahyI是信号分子AHL合成酶的编码基因，luxS是信号分子AI-2合成酶的编码基因，本文研究了嗜水气单胞菌群体感应系统对该菌生物学特性的调控作用。利用同源重组原理，构建中间为卡那霉素抗性基因，两侧为luxS基因上下游序列片段的基因敲除质粒，将其转入大肠埃希菌SM10（λpir）感受态细胞，利用接合将质粒转入嗜水气单胞菌ATCC7966，通过抗性筛选、PCR和

7、DNA测序确认嗜水气单胞菌luxS基因缺失突变株。比较野生株和luxS基因缺失突变株生长速度、AI-2合成、胞外蛋白酶合成及生物膜形成的差异。结果显示，与野生株相比，luxS缺失突变株生长周期延长，基本丧失合成AI-2和胞外蛋白酶的能力；突变株生物膜形成能力降低，生长24h时生物膜形成能力为野生株的14.5%，36h时生物膜形成能力为野生株的60.0%，突变株生物膜形成速度明显比野生株缓慢，结构更为疏松。利用同源重组原理，构建中间为氯霉素抗性基因，两侧为ahyI基因上下游序列片段的基因敲除质粒，将构建好的质粒转入大肠埃希菌SM10（λpi

8、r）感受态细胞，利用接合将质粒转入嗜水气单胞菌ATCC7966，通过抗性筛选、PCR和DNA测序确认嗜水气单胞菌ahyI基因缺失突变株。比较野生株和ahyI基因缺失突变株生长速度、胞外蛋白酶合