寡孢节丛孢GPCR(G protein coupled receptor)相关基因的功能初步研究.pdf

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1、分类号０９３密级公开ＵＤＣ编号ｆ余Ａ彎硕女研《４＃化絶Ａ題目寡拖节丛拖ＧＰＣＲ（Ｇｐｒｏｔｅｉｎｃｏｕｐｌｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒ）巧关基因的功能初步研究学院（所、中也）省部共建云南生物巧源保护与利用国家重点連验室专业名称微生物学研巧生姓名周餘学号１２０１３０００９Ｑ１导师姓名杨舍睾职称研巧巧二０－六年五月论女独创性声明及使用授权本论文是作者在导师指导下取得的研巧成果。除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研巧成果，不存在飄窃或抄袭

2、行为一。与作者同工作的同志对本研巧所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。（，现就论文的使用对云南大学授权如下：学校有权保留本论文含电子版）也可Ｗ采用影印、缩印或其他复制手段保存论文；学校有权公布论文的全部或部，可Ｗ将论文用于查阅或借阅服务分内容：学校有权向有关机构送交学位论文用于学术规范审查、社会监督或评奖；学校有权将学位论文的全部或部分内容录入有关数据库用于检索服务。（内部或保密的论文在解密后应遵循此规定）也＞＾＇１＇乂研究生签名：闻静导师签名；日期；一＿云南大学二零一六届硕±学位论文寡抱节丛拖

3、ＧＰＣＲ（ＧｒｏｔｅｉｎＣ０ｌｅｄｒｅｃｔ：ｏｒ）ｐ叩巧相关基因的功能初步研巧研究生：周静导ｆｊｐ：杨金奎研巧员专业：傲生物学方向：真茵分子生物学资助项目ＮＳＦＣ－云南联合基金重点项目：捕食线虫真菌形成捕食器官的信号调控机制研巧（编号：Ｕ１４０２２６５）国家自然科学基金项目：ＲＧＳ蛋白调控寡抱节从袍菌丝分化及致病性的分１子机理（编号：３２７２０９３）摘要在我国，植物病原线虫造成的危害己经成为农业生产的第二大类病害，食线虫真菌在控制线虫方面具有独特的优势Ｗ及重要的研究价值。寡袍节丛抱一（Ｊｒ娩

4、ｒｏｂｏ＾ｏ／Ｚｏｓｐｏｒａ）巧ｇ作为线虫和食线虫真菌相互作用研究的代表菌株，一－－ｄ直备受关注。寡抱节丛抱产生的捕器兰维菌网（ｔｈｒｅｅｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｔｒａｓ３Ｄｔｒａ）ｐ，ｐ是其从腐生转变为寄生生活方式的显著标志，然而其捕器形成的信号调控详细机理还不清楚。ＧＰＣＲＧｒｏｔｅｉｎｃｏｕｌｅｄｒｅｃｅｔｏｒ是Ｇ蛋白信号通路的重要组成，（ｐｐｐ）。它位于细胞膜，能够感受外界的信号并把信号传递到细胞内本论文Ｗ寡抱节丛袍为野生菌株，Ｗ１１个ＧＰＣＲ基因（ＡＯＬｓ０００５４ｇｌ５、ＡＯＬｓ００１６９ｇ４４、＿＿ＡＯＬ＿ｓ

5、０００５４ｇ２０７、ＡＯＬ一ｓ００（Ｈ５ｇ２２３、ＡＯＬ＿ｓ０００７６ｇ２４９、ＡＯＬ＿ｓ００２１０ｇ３０１、ＡＯＬｓ００２＂３０１、ＡＯＬｓ００００６４２０、ＡＯＬｓ０００９７５巧、ＡＯＬｓ０００４３ｇ７０５、＿ｇ＿ｇ＿ｇ＿ＡＯＬ＿ｓ０００４３ｇ７６８）为研巧对象，利用同源重组原理进行基因敲除，初步探巧了ＧＰＣＲ基因一在寡袍节义拖中的功能。ＧＰＣＲ蛋白是个蛋白质超家族，是目前己知的最大的受体家族，位于信号途径的上游，涉及下游多条信号途径和相关的生一些模式真菌中证实参与感知环境理生化过程。ＧＰＣＲ己在、致病性、代谢、免疫和生长发育等过程

6、的调控，但是在食线虫真菌中ＧＰＣＲ基因的功能还没有被报导。主要实验结果：１、ＧＰＣＲ蛋白的功能保守结构巧预拥和聚类分析。寡拖节化抱１１个ＧＰＣＲ２３－１蛋白的分子量在７６ｋＤａ之间，隊了２１０ｇ３０１，其余的１０个ＧＰＣＲ蛋白都有个或多个保守的功能结构域，其中７６２４９（７世１２ｓｕｅｒｆａｍｉｌｙ、Ｇｉｔ３Ｃ）、６４２０ｇｐ＿ｇ＿了也２ｓｕｅｒｆａｍｉｌ、Ｇｉｔ３Ｇ、ＤＵＦ３３８１ｓｕｅｒｆａｍｉｌ、９７５５８（７ｔｍ２ｓｕｅｒｆａｍｉｌ、（ｐｙ＿ｐｙ）ｇ＿ｐｙ＿Ｇｉｔ３＿Ｃ）、４３ｇ７６８（ＡＢＡ＿ＧＰＣＲ

7、、ＤＵＦ３７３５）这４个蛋白含有多个蛋白超家族保守结构域，其功能可能与多个生物学过程有关。而２１０ｇ３０１在ＧｅｎＢａｎｋ和虹ｔｅｉｐｒｏｓｃａｎ网页上都没有预测到蛋白保守结构域。聚类结果表明，寡抱节丛抱的ＧＰＣＲ蛋白聚类在四个进化分支，Ｈ株捕食线虫真菌（寡抱节义袍、坚粘抱１￡）ＰＣ民单顶抱和．■ｓｆｅｎｏＡｒａｃＡａ）的基因组都含有较多的Ｇ蛋白。２、、构建祀基因敲除载体转化原生质体、筛选阳性转化子，及表型特征比－较。转化酵母细胞，成功构建了１１个ＧＰＣ民範基因的敲除载体，并使用ＣａＣｋＰＥＧ介导的Ａｏ／杳原生质体转化，获得

8、了９个ＧＰＣＲ基因的阳性转化子，并对