实验方案(最终版)费下载.doc

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1、实验方案的制定（-）实验名称：蛋白质含量测定法——考马斯亮蓝法（二）实验时间：第14-15周（三）实验地点：生命科学学院实验楼307或其他实验室。（四）实验人员：邓泰濠，何国杰，（五）实验目的：1.学习并掌握考马斯亮蓝法（Bradford法）测定蛋白质含量。2.学会使用721或722型分光光度计（六）实验材料取材：燕塘牛奶仪器设备:lOOul微量进样器，2个枪头，可见光分光光度计，1ml移液管3支，2ml移液管2支，试管11支，25ml容量瓶1个，旋涡混合器离心机，1支5ml移液管，3个洗耳球主耍试剂：燕塘牛奶，考马斯亮兰G

2、-250染料试剂，无离子水考马斯亮兰G—250染料试剂：称100mg考马斯亮兰G—250,溶于50ml95%的乙醇后，再加入120ml85%的磷酸，用水稀释至1升.标准蛋口质溶液:牛血清口蛋口（BSA）（电泳纯）用0.15mobL-配制0.15mol/LNaCl,pH=7的磷酸缓冲液无离子水（七）实验方法：1、蛋白质标准曲线的制作2提取：将燕塘牛奶倒在25ml容量瓶中，摇匀。3•按顺序滴加各途中溶液。4••测量分光光度值；5••制作标准曲线（八）实验过程：（1）取BSA标准溶液（lmg/ml）各0、20、40、60、80、l

3、OOul于不同试管中（蛋白质含量分别为0、20、40、60、80、lOOug）,不足100ul的用0.15mol*L_1NaCl调至100ulo于以上试管中加入5ml蛋白质试剂,混匀。2min后各取2〜3ml于3ml比色杯屮，以空白作为对照，用分光光度计测定595nm的吸收值。管号空白123451mg/mlBSA(ul)0204060801000.15MNaCl(ul)100806040200总体积（ul）100100100100100100和为蛋白质含M（ug）020406080100G-250(ml)555555OD59

4、5（2）取8支试管，1支作空白，3支留作未知样品，其余试管分为两组按表屮顺序，分别加入样品、水和试剂，用蛋白质溶液给各试管分别加入:0、0.2、0.6、0.8>1ml,然后用无离子水补充到2ml。最后各试管中分别加入5.0ml考马斯亮兰G-250试剂，每加完一管,立即在旋涡混合器上混合（注意不要太剧烈，以免产生大量气泡而难于消除）。未知样品的加样量见下表中的第6、7、8管。（3）加完试剂2〜5分钟后，即可开始用比色皿，在分光光度计上测定各样品在595nm处的光吸收值A595,空白对照为第1号试管，EP2mlH2O加5.0ml

5、G—250试剂。注意：不可使用石英比色皿（因不易洗去染色），可用塑料或玻璃比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇荡洗，以洗去染色。塑料比色皿决不可用乙醇或内酮长吋间浸泡。（4）以各试管加牛奶的量（ml）为横座标，用吸光度值A595为纵座标，作图，即得到一条标准曲线。由此标准曲线，根据测出的未知样品的A595值，即可查出未知样品的蛋白质含量。（九）实验结果：准确记录计量观察指标的实验数据和定性观察指标的实验变化。试管号12345678燕塘牛奶（ml）未知样品（ml）00.20.60.81.00.20.60.8蒸馅水（ml）21.

6、81.41.211.81.41.2考卩斯亮蓝G-250试剂（ml）5.05.05.05.05.05.05.05.0OD(595)2•作出标准曲线，并在表屮查出未知牛奶蛋白质溶液。（十）结果分析：每次实验结果应做必要的数据处理和分析，并有明确的文字小结。）实验环境：按记录本上要求，记录当天的天气情况和气候（温度、湿度）。（十二）实验报告的汇总，要得出明确的结论。实验方案的制定（-）实验名称：蛋口质含量测定法——考马斯亮蓝法（-）实验时间：第14J5周（三）实验地点：生命科学学院实验楼307或其他实验室。（四）实验人员：何碟花，

7、朱培琪（五）实验目的：1.学习并掌握考马斯亮蓝法（Bradford法）测定蛋口质含量。2.学会使用721或722型分光光度计（六）实验材料取材：维他奶牛奶仪器设备：可见光分光光度计，1ml移液管3支，2ml移液管2支，试管8支，25ml容量瓶1个，旋涡混合器。主要试剂：维他奶牛奶，考马斯亮兰G—250染料试剂，无离子水考马斯亮兰G—250染料试剂：称lOOmg考马斯亮兰G—250,溶于50ml95%的乙醇后，再加入120ml85%的磷酸，用水稀释至1升.（七）实验方法：1・提取：将维他奶牛奶倒在25ml容量瓶中，摇匀。2•按

8、顺序滴加各途中溶液。3.测量分光光度值；4.制作标准曲线（八）实验过程：（1）取8支试管，1支作空白，3支留作未知样品，其余试管分为两组按表中顺序，分别加入样品、水和试剂，用蛋白质溶液给各试管分别加入：0、0.2、0.6、0.8>1ml,然后用无离子水补充到2ml。最后各试管屮分别加入5.