[精品]手把手教你使用Imagepro Plus(七) 图象分析策略.doc

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1、2006-08-0310:26文章来源：丁香园点击次数：1127有了图彖分析软件，该怎么应用它来分析工作中的图片呢？这就涉及到图片分析的策略。这并没有一个权威的或者是已经右定论的方法。因此我在这甲-只能讲讲我自己作过的一些显微镜图片分析处理的方法。从我自己的体会来说，儿乎每一项分析其策略都不同。我也不敢说自己的作法就是正确的。也没有多少文献可供参考。比如免疫纽化染色图片的图象分析方法，查过一些文献,提到图片的数字分析处理时往往就儿句话。有许多还是用图象分析仪测量的。我怀疑他们自己也没弄明白具体的分析策略是什么。有人是这样作的：使

2、用正圆形AOIT具，在一张免疫纽化图片上随机选取五个位置，分别测量这五个位置上这个正圆形区域的平均光密度，得到一个平均光密度值与标准差。我认为这样作是错误的。因为这个平均光密度值的真值就是这张图片整个的平均光密度值。因此只要选一个矩形AOI,大小就是这张图片的尺寸，其平均光密度值就是刚才那个平均值的真值,没仃标准差。要作好免疫组化图片的数字分析，从拍摄显微镜照片时开始就要考虑操作细节了。作切片时要保证各个切片条件的一致就不说了，在使用数码相机拍摄切片照片时得注意什么呢？1•显微镜的壳度要前后保持一致。这包括电源的电压要稳定，最好

3、给显微镜加稳压电源，光源壳度调节在拍摄一组照片的过程中不能动，聚光镜也不能调。2数码相机不能用自动调节设負，全部用手动设置。包括曝光时间、变焦、光圈。还右一个很多人都想不到的地方：H动白平衡功能要关掉。前而的照片中冇儿张看上去背景是浅蓝色的，这就是数码相机的H动门平衡功能在起作用。因为整个画而都是黄色的染色，相机就会认为画而色温偏低，要进行一下较正，给加点蓝色吧。浅蓝色背景其光密度打浅黄色的阳性区域差不多，这样就给准确测量光密度带来了更大的误差。3.拍摄荧光照片时自动曝光所带来的影响更大。前面冇一张荧光照片，是从木论坛里找出的。

4、这张照片曝光过度了，结果是最亮的儿个细胞呈现出了黄色，而不是它们木身的红色或绿色。另外在细胞周囤出现了光晕，给数字处理时的选色操作带来了困难。在选収AOI时不易选中准确的细胞界线。4.在拍摄荧光照片时阳性细胞的光强度很大，阴性细胞光强度很弱。如果都用自己曝光拍摄，相机自己调节曝光时间，结果使者在照片上呈现出相同的光强度，这还怎么分析呀？5.在拍摄双染色荧光切片时，如果要分析两种荧光各白的光强度，还在用单色CCD分别加各个染料的滤光片分别拍摄其单色照片分别分析比较准确。用彩色相机拍摄时河题会出在同一个位置两种荧光都冇的地方，在彩色

5、照片上这里会呈现出第三种颜色，数字照片的格式似乎很难分清这两种荧光在这里各占多少比例。也许还是举个例了来讨论一下分析策略吧。从宜观来看这些切片图彖，处理后切片整体感觉其“黄色”越来越浓。正常组织也仃一点黄色的地方，而阴性对照组织则一点黄色的地方也没冇。分别测量一下各个照片整体的平均光密度(densitymean)0阴性正常一天三天五天191170175163155看上去用density(mean)测量其平均密度就行，备个片子Z间右差异。可是把各组切片都这么测量一下，问题就来了，别忘了每组有I•来张切片，其光密度值各仃不同，因此进

6、行了统计学处理后发现，除阴性组以外，其他各组之间并无显著性差异。看来简单地测量整张图片的densitymean是不行的。下一个招是测量图片中黄色区域的累积光密度(IOD)阴性组儿乎没有黄色区域，IOD很小。正常组也有黄色区域，与一天组、三天组Z间，IOD没有显著性差异。五天组的实在是太“黄”了，其累积光密度与其他组有显著差异了。其实图片中细胞间隙的背景也是有一定光密度的，测量一下，它的密度值与阳性区域差得还真不太大，这个密度值应该被扣去。再加一招，计算每张图片中的：阳性区域光密度值•邙H性区域中阴性部分光密度值)二阳性区域IOD

7、-C阴性区域densitymean)X邙H性区域Area)式中阳性区域IOD是照片统计数据中IOD的SUM值。阴性区域Densitymean是阴性区域density(mean)的平均值。阳性区域Area是Area的SUM值。这冋齐组之间的差异就表现出来了。不过这个策略是否正确，我也不敢较真。这些照片的背景是浅蓝色的，说明照片拍得还不够理想。这种扌II背景的作法是否合适呢？这个主题实际上太复杂了，太多了。写不完的。真希望大家学会了用IPP后把自己T作中的作法也加进来交流交流。我只能到此暂停一下。以后再慢慢增加。