免疫学技术及应用.ppt

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1、免疫学技术及应用第一节抗原或抗体的检测抗原和相应抗体，无论在体内或体外相遇，均可发生各种各样的反应，统称为抗原抗体反应。抗原-抗体反应包括沉淀反应、凝集反应、溶解反应、补体结合反应和中和反应等。抗原-抗体反应可用已知的特异性抗体检测未知的抗原；也可用已知的抗原检测未知的抗体。免疫荧光技术、免疫酶技术、同位素标记技术、发光免疫分析等免疫标记技术提高了抗原抗体反应的敏感性。抗原抗体反应的规律和特点抗原与抗体能够特异性结合是基于两种分子间的结构互补性与亲和性，这两种特性是由抗原与抗体分子的一级结构决定的。1、特异性：一种抗

2、原只能和由它刺激产生的抗体相结合，不能跟与它无关的抗体发生反应。这种特性是由抗原的决定簇基于抗体可变的的化学组成、空间立体构型所决定的。2、定比性：抗原一般都是多价的，而抗体（IgG）则是二价的，只有二者比例适合时，抗原抗体才能结合得最充分，形成的抗原抗体复合物最多，反应最明显，结果出现最快，此称为等价带。3、可逆性：抗原与抗体的结合虽具有稳定性，但由于二者之间是非共价键结合，因此又是可逆的，在一定条件下可解离，且解离后各自生物活性不变。4、分阶段反应：第一为抗原与抗体发生特异性结合的阶段，此阶段反应快，仅需几秒至几

3、分钟，但不出现可见反应。第二为可见反应阶段，此阶段反应慢，往往需要数分钟至数小时。5、敏感性：不仅可用于定性，还可用于检测极微量的抗原抗体，其灵敏程度大大超过当前应用的常规化学方法。抗原抗体比例对反应现象的影响抗原抗体的检测方法凝集反应沉淀反应补体溶血反应和补体结合反应中和反应用标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应凝集反应(Agglutination)细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后形成凝集现象，称为凝集反应。1、直接凝集：将细菌或红细胞与相应的抗体直接反应，出现细菌凝集或红细胞凝集现象。又分为玻片法和试管法。2

4、、间接凝集：将可溶性抗原包被在红细胞或乳胶颗粒表面，与相应抗体反应出现颗粒凝集现象。血球凝集沉淀反应（Precipitation)血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物，这一类反应称为沉淀反应。沉淀反应可在液体中进行，如絮状沉淀。大多沉淀反应是用半固体琼脂凝胶为介质，进行琼脂扩散故也称免疫扩散。单向免疫扩散(SingleImmunodiffusion)是将一定量已知抗体混于琼脂凝胶中制琼脂板，在适当位置打孔后将抗原加入孔中扩散。抗原在扩散过程中与凝胶中的抗体相遇，形成以抗原孔为中心的

5、沉淀环，环的直径与抗原含量成正比相关。本法常用于测定血清IgG、IgM、IgA和C3等的含量。含抗体的凝胶沉淀环双向免疫扩散（DoubleImmunodiffusion)位于凝胶不同小孔中的抗原和抗体，当两者相对扩散时，经一定时间后，若两者相对应，会在琼脂小孔间、两者最恰当的比例处形成白色沉淀线。观察沉淀线的位置、数量、形状以及对比各沉淀线之间的关系，可对抗原或抗体进行定性分析。此方法可应用于以下方面：（1）抗原或抗体的纯度鉴定。也可对抗体效价进行初步估算。（2）用已知抗血清（或抗原）检测未知抗原（或抗体）（3）抗

6、原或抗体相对分子量的估计双向琼脂扩散常见孔型有三孔型、双孔型、双排孔型、梅花孔型双向免疫扩散双向免疫琼脂扩散孔型○○○○○○○○○○○○○○三孔型双孔型梅花孔型双排孔型是将抗原与抗体分别加入琼脂凝胶的小孔中，二者自由向周围扩散并相遇，在比例合适处形成沉淀线。如果反应体系中含两种以上的抗原抗体系统，则小孔间可出现两条以上的沉淀线。本法常用于抗原或抗体的定性、组成和两种抗原相关性分析的检测。免疫电泳（Immunoelectrophoresis)免疫电泳为区带电泳与双向免疫扩散的结合。先利用区带电泳技术将不同电荷和分子量

7、的蛋白抗原在琼脂内分离，然后在与电泳方向平行的方向上开槽，加入抗血清。37℃下使两者扩散，各区带蛋白在相应的位置与抗体反应形成弧形沉淀线。火箭电泳（RocketElectrophoresis)火箭电泳也称免疫扩散，是把单向免疫扩散同电泳结合在一起的方法。抗原在含有定量抗体的琼脂中泳动，两者比例适宜时，在较短时间内生成锥形的沉淀峰。在一定浓度范围内，沉淀峰的高度与抗原含量成正比。此法的特点是需时较短，故可用于快速沉淀标本中抗原的含量。火箭电泳示意图双向免疫电泳（twodimentionalimmuno-electrop

8、horesis）是一种将火箭电泳与血清免疫电泳相结合的方法。先将血清用电泳分离出各成分，然后切下凝胶板转移至另一已加有抗血清的凝胶上，进入垂直方向的第二次电泳，形成呈连续火箭样的沉淀线。补体结合反应（ComplementFixation,CFT)补体结合试验是一种有补体参与，并以绵羊红细胞和溶血素（红细胞的特异性抗体）是否发生溶血反应作指示的一