免疫学技术在科研中的应用.ppt

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1、免疫学技术在科研中的应用概述免疫学技术发展进程的主要阶段自然的肉眼观察的抗原抗体反应（沉淀反应、凝集反应）加速的肉眼观察的抗原抗体反应（电泳技术、分离技术）标记性免疫技术提高抗原抗体反应的特异性、敏感性半自动、自动化检验仪器与免疫反应原理结合，加快了反应过程标记技术、单克隆技术、高智能自动化技术的最佳组合免疫细胞相关实验技术：单核巨噬细胞、树突状细胞、NK细胞、T细胞、B细胞，以及这些细胞亚群；免疫分子相关实验技术：抗原（包括抗原肽）、抗体（包括单抗、多抗、基因工程抗体）、补体、细胞因子及其受体、HLA、TLR等

2、；免疫学相关标记技术：荧光、酶、放射、磁珠标记技术和发光分析原理；免疫学相关蛋白质技术：蛋白质电泳、印迹技术（如SDS-PAGE、双向电泳、Western印迹和斑点印迹）、免疫共沉淀技术等；免疫学相关检测技术：流式细胞分析和分选技术、细胞凋亡和细胞周期检测技术、免疫组织化学技术、免疫细胞信号转导研究技术、激光扫描共聚焦显微镜技术等；免疫学实验相关动物模型：自身免疫病动物模型（如自身免疫性脑脊髓炎、自身免疫性甲状腺炎、系统性红斑狼疮等）、感染性疾病动物模型（如利什曼原虫、弓形虫、巨细胞病毒、李斯特菌等）、肿瘤动物模

3、型、器官移植动物模型等；免疫学技术主要相关内容免疫的类型固有免疫innateimmunity适应性免疫adaptiveimmunityOverviewofImmunity5病原微生物固有（innate)/天然(natural)非特异性（non-specific)免疫（immunity）*种群在长期进化过程中逐渐形成的防御功能，乃经遗传而获得，并非针对特定抗原。固有免疫innateimmunity机体接受病原体等抗原（决定基）异物刺激后所产生、仅针对相应病原体等抗原异物发挥效应、使之从体内被清除的防御功能。*个体接

4、触特定抗原（决定基）而产生。*仅针对该特定抗原（决定基）而发生反应。*后天获得；有特异性；有记忆性；作用慢而强。抗原刺激机体适应性免疫可刺激机体产生特异性免疫应答的物质抗原决定簇产生抗体致敏淋巴细胞适应性免疫（adaptiveimmunity）—————————————————————————————固有免疫适应性免疫—————————————————————————————细胞组成粘膜和上皮细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、吞噬细胞、NK细胞、抗原提呈细胞NK1.1+T细胞、γδT细胞B-1细胞产生先天具有后天经抗

5、原刺激而获得作用时效即刻～96小时内96小时后作用特点非特异性特异性无增殖分化，作用迅速特异性细胞克隆增殖、分化无免疫记忆有免疫记忆作用时间作用时间短作用时间长—————————————————————————————固有免疫与适应性免疫的特点8OutlinePartI抗原或抗体的检测PartII免疫细胞的检测PartIII自身免疫病及实验研究举例PartI抗原或抗体的检测抗原抗体反应的特点抗原抗体反应的影响因素常用的抗原抗体反应抗原抗体反应的特点高度的特异性可逆性抗原抗体结合除了空间构象互补外，主要以氢键、静电

6、引力、范德华力和疏水键等分子表面的化学基团之间的非共价方式结合。这种非共价键不如共价键结合稳定，极易受温度、酸碱度和离子强度的影响而解离。抗原抗体比例影响免疫复合物的大小抗原抗体反应的两个阶段11抗原抗体反应的影响因素抗原抗体浓度与比例电解质*抗原抗体特异性结合后，亲水性降低，易受电解质的影响而使表面失去较多的负电荷。温度*适当的温度可增加抗原与抗体分子的碰撞机会，加速抗原抗体复合物的形成。酸碱度*抗原抗体反应的最适pH在6—8之间，pH过高或过低，即过碱或过酸，均可影响抗原、抗体的理化性质。12常用的抗原抗体反

7、应凝集反应沉淀反应免疫标记技术13一、凝集反应细菌、螺旋体和红细胞等颗粒抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为凝集反应（agglutination）是最经典的免疫学检测技术。直接凝集反应间接凝集反应间接凝集抑制试验微粒捕获酶免疫分析技术间接凝集反应将可溶性抗原或抗体吸附在与免疫无关的颗粒载体上，形成致敏颗粒，再与相应抗体或抗原进行反应产生的凝集反应，称为间接凝集反应。颗粒载体有红细胞、聚苯乙烯乳胶颗粒、活性炭颗粒，而相应的凝集现象分别称为间接血球凝集、间接乳胶凝集、间接炭粒凝集反应。将已知特异

8、性抗体致敏的免疫微粒与生物素—亲和素—酶放大系统相结合，最后酶作用于荧光底物，使之发荧光，通过检测荧光强度判断待测抗原的含量。检测肿瘤标记物CAl99、CEA、CAl25、AFP、性激素、甲状腺素T3T4、叶酸、HIV抗体、HCG等微量可溶性抗原。微粒捕获酶免疫分析技术二、沉淀反应免疫沉淀反应:(precipitation)可溶性抗原与相应抗体，在适宜条件下发生结合，出现