消毒液消毒效力及有效期验证.doc

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1、1目的本文件用于验证洁净区按照规定的消毒程序消毒能够达到消毒、防止污染的目的，在消毒有效期内能确保其消毒效力符合要求。2背景公司拟定用75%乙醇和0.1%新洁尔灭对洁净区进行清洁消毒，两种消毒液每周进行更换，防止耐药菌株的产生，用0.5%84消毒液进行洁净服的消毒，本验证是为了确定消毒剂的消毒效果所作的验证，以确认该消毒剂是否能满足需要。3范围本验证用于验证消毒剂消毒效力的测试。4参考文件《消毒液配制使用管理程序(SOP-030)》、《检定菌管理程序(SOP-022)》5术语和定义N/A6职责质量法规部负责本验证方案的制定，验证的执行和完成验证报告；微生物组负责验证中相关的测试；生产技术部和

2、质量法规部负责本方案和报告的审核；7材料和设备7.1材料表1材料清单序号材料名称备注1金黄色葡萄球菌――2大肠埃希菌――3枯草芽孢杆菌――4白色念珠菌――7.2设备表2设备清单序号设备名称设备型号设备编号1生化培养箱SHP-0802霉菌培养箱MJP-1508验证程序8.1为了确认消毒剂的消毒效力，通过定量悬浮试验法和表面实验法进行验证试验。1)中和剂的选择：通过该试验，确认所用的中和剂对对应的消毒剂有良好的中和作用，对试验用菌及其恢复期培养是否有害或不良影响。菌种：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌。消毒剂的配制浓度：乙醇溶液配制成75%的浓度、新洁尔灭配制成0.1%的浓度

3、、84消毒液配制成0.5%的浓度。中和剂的选择：乙醇采用3%吐温80为中和剂，新洁尔灭1%的卵磷脂+0.1%吐温80为中和剂，84消毒液采用1.5%硫代硫酸钠为中和剂。3%吐温80配制方法：取吐温803.0ml，加纯化水至100ml，121℃高压灭菌15分钟，即可。精选范本,供参考！1%的卵磷脂+0.1%吐温80配制方法：卵磷脂1g，吐温800.1ml加蒸馏水至100ml，121℃高压灭菌15分钟，即可。1.5%硫代硫酸钠配制方法：取硫代硫酸钠1.5g，加纯化水稀释至100ml，121℃高压灭菌15分钟，即可。进行中和剂选择试验时需设置平行6组实验：第一组消毒剂+菌悬液；第二组(消毒剂+菌悬

4、液)+中和剂；第三组中和剂+菌悬液；第四组(消毒剂+中和剂)+菌悬液；第五组0.9%氯化钠溶液+菌悬液；第六组稀释液+中和剂。●第1组目的：观察消毒液对试验菌有无杀灭或抑制能力。操作方法：吸取消毒剂4.5ml于试管内，吸加0.5ml菌悬液(含菌量为1×108cfu/ml～5×108cfu/ml)，混匀。作用10分钟，吸此样液0.5ml至含有4.5ml稀释液试管中混匀。吸取该最终样液0.5ml，接种于平皿中，做活菌培养计数。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌用TSA培养基；白色念珠菌用SDA培养基。●第2组目的：观察残留消毒剂被中和后受到消毒剂作用后的试验菌是否恢复生长。操作方法：吸取消

5、毒剂4.5ml于试管中，加0.5ml菌悬液，混匀，作用10分钟，吸此样液0.5ml，加于含4.5ml中和剂溶液管中，作用10分钟，吸此样液0.5ml至含有4.5ml稀释液试管中混匀，吸取该最终样液0.5ml，接种于平皿中，做活菌培养计数。●第3组目的：观察中和剂是否有抑菌性。操作方法：吸取中和剂4.5ml于试管内，再吸加0.5ml菌悬液，混匀，作用10分钟，吸取该最终样液0.5ml，用稀释液做10倍系列稀释至10-3，取相应稀释级各0.5ml，分别接种于平皿中，做活菌培养计数。●第4组目的：观察中和产物，或未被完全中和残留消毒剂对试验菌的生长繁殖是否有影响。操作方法：吸取中和产物溶液(以1份

6、消毒剂加9份中和剂，作用10分钟配制而成)4.5ml于试管内，再吸加0.5ml菌悬液，混匀，作用10分钟，吸取该最终样液0.5ml，用中和产物溶液做10倍系列稀释，稀释至10-3，取相应稀释级各0.5ml，分别接种于平皿中，做活菌培养计数。●第5组目的：作菌落数对照用。操作方法：吸取稀释液4.5ml于试管内，再吸加0.5ml菌悬液，混匀，作用10分钟，吸取该最终样液0.5ml，用稀释液做10倍系列稀释至10-3，取相应稀释级各0.5ml，分别接种于平皿中，做活菌培养计数。●第6组目的：作为阴性对照用。操作方法：分别吸取稀释液与中和剂各0.5ml于同一无菌小平皿内，倒入上述试验同批次的培养基1

7、5ml～20ml，培养观察。如出现细菌生长，可能提示试验材料或操作过程中有污染，应重新进行试验。样品培养：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌于30～35℃培养3天，白色念珠菌于20～25℃培养5天，培养结束后点计菌落数。结果判定：第6组无菌生长第3、4、5组有相似菌落数生长，其每组间菌落数误差率不超过15%，计算公式如下：第1组无菌生长或仅有少数试验菌菌落生长第2组菌落数比第1组菌落数多，但比第3、4、