抗体芯片在白血病研究上的应用.doc

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1、iotech,Inc..GuangzhouroteinarraypioneercompanyRayBiotech抗体芯片在白血病研究上的应用杂志名称:Leukemia(Nature子刊)文献题目:A'telomere-associatedsecretoryphenotype^cooperateswithBCR-ABLtodrivemalignantproliferationofleukemiccells本实验所用产品:RayBiotech小鼠抗体膜芯片AAM-CYT-1000(96个炎症、生长、趋化

2、相关细胞因子)实验样品:细胞培养上清(不含血清)和细胞裂解液研究背景:端粒牛物学对疾病发展和机体的衰老起关键作用。在人类癌症小,端粒酶促进癌细胞牛长,而端粒的缩短被认为是“双刃剑”,端粒的加速缩短使得细胞衰老、DNA破损,从而抑制肿瘤的发展。相反,端粒加速缩短经常发现在癌症晚期阶段,例如白血病,因此出现这种假设,衰老使得端粒缩短,引起染色体不稳定导致病情恶化。白血病进展的分子机制并不是很清晰,一个可能的原因是白血病干细胞的遗传不稳定性,另外,口血病人的端粒重复区域有缺失,且端粒缩短的程度与口血病的发

3、展阶段、对其治疗的反应有关。且在片血病的晚期阶段,端粒酶活性水平升高,细胞周期调节基因发牛突变,有可能阻止后续的诱导衰老和白血病衰退。然而,端粒和CML病理牛理功能进展背后的机制仍有待阐明。研究思路1细胞培养和BCR-ABL转染模型建立细胞模型分组:•CML-WT-未敲除端粒酶的小鼠白血病干细胞(具有端粒酶)•CML-G2…敲除端粒酶的小鼠白血病干细胞(端粒未缩短)•CML-IG4…敲除端粒酶的小鼠白血病干细胞(端粒显著缩短)•CML-iG4sen―CML-iG4衰老细胞2测定细胞活性实验iotec

4、h,Inc..Guangzhouroteinarraypioneercompany生长增殖、周期、凋亡、衰老和染色体的检测免疫分型、药物刺激实验测定端粒长度telomerelength(kb)505050505050506655443322从图可以看出,白血病样细胞的生长依赖于端粒的长度,即使没有端粒酶的存在,端粒没有缩短的情况下白血病样细胞还是会快速增长。端粒缩短后体外培养很早期(6天)就会有细胞生长阻滞的现象。aCML-WTsubGl3.28%G150.0%S31.8%G2/M14.9%1via

5、bility98%±1.0CML-G2subGl1.99%G186.4%S6.32%G2/M5.23%uCML-iG4她“迢9898%±1.5(%)uo匸nqu-s一pepAo=8subGlG1604020CML-WTCML-G2CML-iG4*atG容G2/MCML-iG4,G1期增加,S期减少,表明细胞衰老,增值能力下降,推测由于端粒缩短,导致细胞衰老,细胞衰老抑制了细胞增殖。3RayBiotech抗体芯片检测和microRNA芯片蛋白芯片检测使用的样品为各组细胞培养上清(不含血清)和细胞裂解液

6、iotech,Inc..GuangzhouroteinarraypioneercompanyCML-G2CMLhG4CMLG"0AAM-CYT-100抗体芯片结果I(1AAJJS0£QAi亘al)Uo_ssa」dx2S£

7、ML-G2表达比CML-WT增高,例如ILla,CCL5/RANTES,IGF-I/TNFRSF1lb/osteoprotegerin,与mRNA结果一致。将细胞上清的蛋口表达数据做散点图分析结果表明,CML-G4细胞因子的表达整体较CML-G2的细胞因子表达下降。CML-iG4sen的细胞因子表达最为显著高,证明了CML-iG4sen衰老分泌表型建立成功。细胞裂解液的结果与上清一致。4数据统计:unpairedt-testStatisticsToolboxofMatLab2012biotech,I

8、nc..Guangzhouroteinarraypioneercompany结果:研究表明,慢性粒细胞口血病样细胞的端粒屮等缩短导致与增殖控制有关的促炎细胞因子和牛长因子的分泌増加,从而促进了细胞的增殖。在缺失端粒酶的情况下,端粒缩短至关键长度后,可以诱导白血病样细胞衰老,从而减轻肿瘤进展。RayBiotech抗体芯片在探讨这种机制的过程屮扮演了非常重要的筛查角色,且芯片能从整体的、宏观的角度上发现细胞因子改变与细胞表型改变的密切相关。AAM-CYT-1000(96个

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