【精品】微生物检验常规鉴定技术.doc

《【精品】微生物检验常规鉴定技术.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、第一章微生物检验常规鉴定技术课堂教学计划（1学时）名称第一章微生物常规鉴定技术目的要求复习微生物检验基本知识，并重点掌握微生物常规鉴定技术;如形态结构和培养特性观察以及微生物检验中常用的生化反应。重点难点微生物常规鉴定技术教学内容及教学组织教学方法、手段及时间安排第一章微生物常规鉴定技术一、接种二、分离纯化和培养技术二、培养一、形态结构和培养特性观察1、微生物的形态结构观察主要是通过染色2、细菌细胞在固体培养基表面形成的细胞群体叫菌落二、生理生化试验微生物检验中常用的生化反应通过讲授和演示等方式进行;并采取举例方式进行教学，使其理论与实践相结合，便于理解记忆。第一章微生物检验基本知识包括显微镜

2、、染色技术、培养基制备技术、接种、分离纯化和培养技术等。接种.分离纯化和培养技术一、接种将微生物接到适丁它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。1、接种工具和方法接种和分离工具1.接种针2.接种环3•接种钩4.5•玻璃涂棒6•接种圈7.接种锄8.小解剖刀常用的接种方法有以下儿种：1）划线接种这是最常用的接种方法。即在固体培养基表面作來回直线形的移动，就可达到接种的作用。常用的接种工具有接种环，接种针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。2）三点接种在研究霉菌形态时常用此法。此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。除

3、三点外，也有一点或多点进行接种的。3）穿刺接种在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。做穿刺接种时，用的接种工具是接种针。用的培养基一般是半固体培养基。它的做法是：用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。4）浇混接种该法是将待接的微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45°C左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的冃的。待平板凝固Z后，置合适温度下培养，就可长岀单个的微生物菌落。5）涂布接种与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀

4、分布，就可长岀单个的微生物的菌落。6）液体接种从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中，或者从液体培养物屮，用移液管将菌液接至液体培养基屮，或从液体培养物屮将菌液移至固体培养基屮，都可称为液体接种。7）注射接种该法是用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内,如人或其它动物中，常见的疫苗预防接种，就是用注射接种，接入人体，来预防某些疾病。8）活体接种活体接种是专门用于培养病莓或其它病原微生物的一种方法，因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。所用的活体可以是整个动物；也可以是某个离体活组织，例如猴肾等；也可以是发育的鸡胚。接种的方式是注射，也可以是拌料喂养。2、无菌操作培养基经高压灭菌后

5、，用经过灭菌的T具（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。在实验室检验中的各种接种必须是无菌操作。<4>tS>图5-4斜面接种吋的无菌操作⑴接种灭菌（2）开启棉塞（3）管口灭菌（4）挑起菌苔（5）接种（6）塞好棉塞二、分离纯化含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物（Mixedculture）o如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养（Pureculture）o在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均耍求为纯的培养物。得到纯培养的过程称为分离纯化，方法有许多种。1、倾注平板法首先把微生物悬液通过一系列稀

6、習，取一定量的稀释液与熔化好的保持在40-50°左右的营养琼脂培养基充分混合，然后把这混合液倾注到无菌的培养皿中，待凝固Z后，把这平板倒盖在恒箱中培养。单一细胞经过多次增殖后形成一个菌落，取单个菌落制成悬液，重复上述步骤数次，便可得到纯培养物。（图5—5,a）图5-5倾注平板法Q）涂布平板法（b）图解1.菌悬液2.熔化的培养基3.培养物4.无菌水2、涂布平板法首先把微生物悬液通过适当的稀释，取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上，然后用无菌的玻璃刮刀把稀释液均匀地涂布在培养基表而上，经恒温培养便可以得到单个菌落。（图5-5,b）3、平板划线法最简单的分离微生物的方法是平板划线法。用

7、无菌的接种环取培养物少许在平板上进行划线。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。（图5—6）当接种环在培养基表面上往后移动时，接种环上的菌液逐渐稀释，最后在所划的线上分散着单个细胞，经培养，每一个细胞长成一个菌落。（图5-7）4、富集培养法富集培养法的方法和原理非常简单。我们可以创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物