【精品】微生物常规鉴定技术与方法

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1、微生物常规鉴定技术一、形态结构和培养特性观察1、微生物的形态结构观察主要是通过染色，在显微镜卜对其形状、大小、排列方式、细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽抱等）及染色特性进行观察，出观地了解细菌在形态结构上特性，根据不同微牛物在形态结构上的不同达到区别、鉴定微牛物的bl的。2、细菌细胞在固体培养基表而形成的细胞群体叫菌落（colony）o不同微生物在某种培养基中生长繁殖，所形成的菌落特征有很大差异，而同-•种的细菌在一•定条件下，培养特征却有一定稳定性。，以此可以对不同微生物加以区别鉴定。因此，微生物培养特

2、性的观察也是微生物检验鉴别屮的一项重要内容。1）细菌的培养特征包括以下内容：在固体培养基上，观察菌落大小、形态、颜色（色素是水溶性还是脂溶性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性等。在液体培养中的表面牛长情况（菌膜、环）混浊度及沉淀等。半固体培养基穿刺接种观察运动、扩散情况。2）霉菌酵母菌的培养特征：人多数酵母菌没有丝状体，在固体培养基上形成的菌落和细菌的很相似，只是比细菌菌落大TL厚。液体培养也和细菌和似，冇均匀生长、沉淀或在液面形成菌膜。霉菌冇分支的丝状体，菌丝粗长，在条件适宜的培养基里，菌丝无限仲长

3、沿培养基表面蔓延。霉菌的基内菌丝、气牛菌丝和他子丝都常带有不同颜色，因而菌落边缘和中心，止面和背面颜色常常不同，如青霉菌：抱子青绿色，气生菌丝无色，某内菌丝褐色。霉菌在固体培养表而形成絮状、绒毛状和蜘蛛网状菌落。一、形态结构和培养特性观察1、微生物的形态结构观察主要是通过染色，在显微镜下对其形状、大小、排列方式、细胞结构（包插细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽他等）及染色特性进行观察，直观地了解细菌在形态结构上特性，根据不同微生物在形态结构上的不同达到区别、鉴定微牛物的目的。2、细菌细胞在固体培养基表而形成的细胞群体叫菌

4、落（colony）o不同微生物在某种培养基中生长繁殖，所形成的菌落特征有很人差异，而同一种的细菌在一定条件下,培养特征却有一定稳定性。，以此可以对不同微生物加以区别鉴定。因此，微生物培养特性的观察也是微生物检验鉴别屮的一项重要内容。1）细菌的培养特征包插以卜内容：在固体培养基上，观察菌落大小、形态、颜色（色索是水溶性还是脂溶性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性等。衣液体培养中的表面牛长情况（菌膜、环）混浊度及沉淀等。半固体培养基穿刺接种观察运动、扩散情况。2）雷菌酵母菌的培养特征：大多数酵母菌没有丝状

5、体，在固体培养基上形成的菌落和细菌的很相似，只是比细菌菌落人H厚。液体培养也和细菌相似，有均匀生长、沉淀或在液面形成菌膜。霉菌令分支的丝状体，菌丝粗长，在条件适宜的培养基•里，菌丝无限伸长沿培养棊表面蔓延。霉菌的基内菌丝、气生菌丝和抱子丝都常带有不同颜色，因而菌落边缘和中心，正而和背而颜色常常不同，如青霉菌：抱子青绿色，气生菌丝无色，基内菌丝褐色。霧菌在固体培养表而形成絮状、绒毛状和蜘蛛网状菌落。込叱生民□s!»00、巳十罔悴5T和.192024町］咬股化a-8252€162G昔莽内场30A■P.G-革兰氏染色：革兰氏

6、染色法是1884年由丹麦病理学家C.Grain所创立的。革兰氏染色法可将所佇的细菌区分为革兰氏阳性菌(G)和革兰氏阴性菌(G—)两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法所以能将细菌分为(T菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G—菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞舉的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。G1W细胞壁中肽聚糖层厚冃交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理片

7、反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色步骤：(1)涂片：涂片方法与简单染色涂片相同。(2)晾T•:与简单染色法相同。(3)固定，与简单染色法相同(4)结晶紫色染色：将玻片置于废液缸玻片搁架上，加适量(以盖满细菌涂面)的结晶紫染色液染色1分钟。(5)水洗：倾去染色液，用水小心地冲洗。(6)媒染：滴加卢哥氏碘液，媒染Imino(7)水洗：用水洗去碘液。(8)脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙胛脱色20-25S至流出液无色，立即水洗。(9)复染:滴加蕃红复染5mino(10)水洗：用水洗去涂片上的蕃

8、红染色液。(11)晾干：将染好的涂片放空气中晾干或者用吸水纸吸干。(12)镜检：镜检时先用低倍，再用高倍，最灰用汕镜观察，并判断菌体的革兰氏染色反应性。(1)实验完毕后的处理：