结核感染T细胞检测.ppt

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1、结核杆菌特异性T细胞应答体外检测实验乐清市人民医院呼吸内科全球疫情：20亿人口曾受到结核分枝杆菌感染2010年新发和复发病例850-920万，死亡病例120-150万全球MDR-TB病例约44万中国和印度占全球病例的40%，中国第二我国疫情：2010年年发病例：100万现有活动性肺结核：500万涂阳肺结核：72万死亡年人数：5.4万年新发MDR-TB人数：10万1.3结核诊断结核诊断细菌培养结核分枝杆菌的感染者，当这些人的血液再次接触到结核分枝杆菌的抗原时，特异性T细胞就能迅速产生IFN-γ。而没有感染结核分枝杆菌

2、的人就不会产生IFN-γ，并且IFN-γ的含量与结核菌的量有很好的对应关系，含菌量越高IFN-γ产生的越多。TB-IGRA就是通过检测体外释放的IFN-γ的含量来检查是否感染结核分枝杆菌的。检测原理通过比较基因组学发现卡介苗和结核分枝杆菌间存在RD区RD1区一般只存在于结核分枝杆菌，可能形成ESX-1分泌机制。该分泌系统中有两个重要蛋白，早期分泌抗原-6(ESAT-6)和培养基滤过蛋白-10(CFP-10)具有较强的Thl表位。随后，ESAT-6和CFP-10作为体外刺激抗原来检测结核分枝杆菌越来越频繁，这种方法被

3、定义为体外T细胞IFN-γ释放试验（IGRA）。NTP结核特异抗原ESAT-6、CFP-100刺激感染过结核的T淋巴细胞产生γ-干扰素PHA[植物血凝素]:刺激T淋巴细胞产生γ-干扰素一个人感染了结核产生γ-干扰素一个人未感染结核不会产生γ-干扰素检测管NTP22±2hNTP离心血浆6点定标夹心法γ-IFN2h2个工作日培养检测管：TB蛋白阳性管：PHA阴性管：无采血，分别加入阴、阳性对照管和检测管1ml37度封闭培养22小时收集上清ELISA定量检测上清中IFN-γ含量检测管阴性对照管阳性对照管培养液刺激抗原培养

4、液无刺激原培养液PHA试剂盒的检测流程TST与IGRA2.3IGRA应用实例●IGRA对涂阴肺结核具有较好的辅助诊断作用小结IGRA不易受BCG接种和NTM感染的干扰，检测MTB感染的特异性高于TST；IGRA对肺结核（涂阳/涂阴）和肺外结核均具有较好的检测性能；IGRA可作为临床结核的辅助诊断方法；IGRA在结核病诊断、流行学调查、疾病发展与治疗效果评价等方面的应用越来越广泛；开展情况欧、美、日、韩等低流行国家和地区已作为常规诊断和筛查指标。国内早就认识到原有方法学的缺陷，列入国家“十一五”重大传染病专项重点研发

5、试剂之一。国内很多大医院相继开展，省内浙一医院、浙二医院、邵逸夫医院、省人民医院、杭州市一医院等等都已经开展或9月1日（新收费执行）就开展。项目收费：2012年新增试行医疗服务项目和价格表250403914，结核感染T细胞检测，收费700元/次谢谢各位专家指导！