正交实验法优化铁皮石斛生根培养体系.pdf

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1、·生物技术·北方园艺２０１７（０２）：１０２～１０４ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１７０２０２５正交实验法优化铁皮石斛生根培养体系刘太林１，刘瑞风２，桂毓３，李黎１，马仲强１（１．天津天狮学院生物与食品工程学院，天津３０１７００；２．天津韩家墅海吉星农产品物流有限公司，天津３００４０１；３．天津农学院园艺园林学院，天津３００３８４）摘要：以铁皮石斛丛生芽为试材，通过三因素三水平正交实验方法优化生根培养体系，研究了不同添加物浓度对生根的影响，以筛选最适的铁皮石斛生根培养基。结果表明：香蕉

2、泥对铁皮石斛生根有极显著的促进作用，培养基成分为１／２ＭＳ＋２．５ｍｇ·Ｌ－１－１ＮＡＡ＋１．５ｍｇ·Ｌ－１香蕉泥时，生根率可达到１００％，为最佳的生根培养基。ＩＢＡ＋１５０ｇ·Ｌ关键词：铁皮石斛；生根培养；正交实验中图分类号：Ｓ５６７．２３＋９文献标识码：Ａ文章编号：１００１－０００９（２０１７）０２－０１０２－０３铁皮石斛为多年生附生兰科珍贵的药用植培养室。选取茎粗约０．１ｃｍ，高度２～３茎节，叶片［１］［２］物，具有一定的提高细胞免疫功能的作用。但呈浓绿色，长势一致的铁皮石斛丛生芽作为试材

3、。其自然生长速度缓慢，繁殖率低，因而产量极少，导原铁皮石斛种子购于浙江省乐清市海上名山铁皮石［３］致国内外市场供应紧缺。斛种植专业合作社。利用组织培养技术，对铁皮石斛进行集约化人１．２试验方法工栽培，是保护和利用铁皮石斛资源的最为有效的１．２．１培养基制备试验用培养基按配方配制后，［４－５］途径。为保证铁皮石斛幼苗的存活率和移栽驯分装入培养瓶后经高压湿热（压力０．１２ＭＰａ、温度［６－７］化期正常生长，生根培养至关重要。已有研究表１２１℃）灭菌２０ｍｉｎ，备用。明，１／２ＭＳ培养基是在铁皮石斛幼

4、苗的生根培养中１．２．２生根培养选取长势一致的铁皮石斛组培使用较多的。ＮＡＡ、ＩＢＡ、香蕉泥等对铁皮石斛生根丛生芽接入培养瓶，每瓶接种３～５株，每种培养基培养有促进作用，并且添加一定量活性炭也有益于接种５瓶，重复３次。培养条件为温度（２５±２）℃，光［９－１１］石斛苗的生根。现利用经过伸长培养的铁皮石照强度１５００～２０００ｌｘ，湿度控制在６０％～７５％，光照１２ｈ·ｄ－１。培养时间约３５ｄ，每５ｄ观察１次铁斛丛生芽进行诱导生根，并采用正交实验，研究了不同生长激素ＮＡＡ（萘乙酸）、ＩＢＡ（吲哚丁

5、酸）和果蔬皮石斛根系生长情况。计算生根率，生根率（％）＝类添加物香蕉泥对诱导生根的影响，以明确生根理生根的丛生芽数／接种的丛生芽数×１００。想的培养基配方，从而解决铁皮石斛繁殖系数低和１．２．３单因素试验采用１／２ＭＳ培养基为基本培养基，添加不同浓度的ＮＡＡ（０～４．５ｍｇ·Ｌ－１）、ＩＢＡ移栽成活率低等问题，进而为工厂化育苗提供理论（０～４．５ｍｇ·Ｌ－１）和不同量的香蕉泥（０～参考。－１）进行生根培养，研究３种因素对铁皮石１８０ｇ·Ｌ１材料与方法斛生根率的影响。１．１试验材料１．２．４正交实

6、验设计在前期单因素试验的基础供试铁皮石斛组培芽取自天津天狮学院生物工上，采用Ｌ（３４）正交实验设计，试验因素及水平见９程实验楼培养室及天津市北辰区董新房子村仙草园表１。１．２．５验证试验通过正交实验确定最佳生根培第一作者简介：刘太林（１９８３－），男，硕士，讲师，现主要从事药用植物栽培育种与生物技术研究与教学等工作。Ｅ－ｍａｉｌ：养基配比，再将最佳试验处理进行３次重复试验，检ｈｕａｊｉｚｉ８３＠１２６．ｃｏｍ．验该培养基在诱导生根培养时的可靠性。基金项目：国家星火计划资助项目（Ｓ２０１２Ａ１００

7、０１４）１．３项目测定收稿日期：２０１６－０９－２６按照铁皮石斛的生根率占５０分，根长度占１０２北方园艺２０１７（０２）：１０２～１０４·生物技术·表１正交实验的因素及水平香蕉泥进行重复试验。其生根率均为１００％，根长平Ｔａｂｌｅ１Ｆａｃｔｏｒｓａｎｄｌｅｖｅｌｓｏｆｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ均为５．７ｃｍ，生根数量较多，根粗壮（图１）。说明该因素Ｆａｃｔｏｒ试验结果较稳定，生根率高，该培养基为最佳培水平ＡＢＣＬｅｖｅｌ养基。ＮＡＡ／（ｍｇ·Ｌ－１）ＩＢＡ／（ｍｇ·Ｌ－１）香蕉泥Ｂ

8、ａｎａｎａｐｕｒｅｅ／（ｇ·Ｌ－１）表２正交实验结果１１．５１．０９０２２．０１．５１２０Ｔａｂｌｅ２Ｒｅｓｕｌｔｓｏｆｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ３２．５２．０１５０试验编号空白综合评价分ＡＢＣ３０分，根粗占２０分不同权重，比较不同处理的生根ＴｅｓｔｎｕｍｂｅｒＢｌａｎｋＣｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅｅｖａｌｕａｔｉｏｎ１１１１１５９情况，给出生根综合评价分。２１２２２８１１．４数据分析３１３３３８６采用Ｅｘｃｅｌ２０１０软件统计试验数据，并用ＳＰＳＳ４２１２３９８５２２３１６７２２．