实验八 细菌鉴定中.ppt

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1、实验八细菌鉴定中常用的生化实验一、实验目的掌握糖发酵试验、淀粉实验、吲哚实验、M.R.及V.P的原理及方法。掌握以上实验的用途。二、实验原理淀粉实验糖发酵实验发酵后产生的有机酸：乳酸、醋酸、丙酸等（溴甲酚紫变色范围pH5.2~6.8,pH<5.2黄色，pH>6.8紫色）发酵后产生的气体：甲烷、氢、二氧化碳等（德汉氏小管内有气泡，产气漂浮）糖发酵试验现象二、实验原理M.R.及V.P实验甲基红试验是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。当细菌代谢糖产生酸时，培养基就会变酸，使加入培养基的甲基红指示剂变色，甲基红指示剂变色范围（红4.4~6.2黄，中间色为橙色）。

2、二、实验原理M.R.及V.P实验VP试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力，如丙酮酸。丙酮酸经缩合、脱羧后生成乙酰甲基甲醇，此化合物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰。二乙酰与蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成红色化合物。二、实验原理吲哚实验吲哚试验是用来检测吲哚的产生。有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。三、实验器材培养基1、淀粉培养基:500ml（分装于四个三角瓶，包扎，121~126℃灭菌30min）蛋白胨10g可溶性淀粉2g氯化钠5g琼脂15~20g牛肉膏5g水1

3、000mlpH7.22、糖发酵培养基：300ml（分装于28只试管，包扎，112~115℃灭菌30min）蛋白胨10g氯化钠5g葡萄糖10g水1000mlpH7.4溴甲酚紫溶液（1.6%水溶液）1ml3、M.R.及V.P实验:600ml（分装于56只试管，包扎，112~115℃灭菌30min）蛋白胨5gK2HPO45g葡萄糖5g水1000mlpH7.2~7.44、吲哚培养基:300ml（分装于28只试管，包扎，121~126℃灭菌30min）蛋白胨10g氯化钠5g水1000mlpH7.6三、实验器材菌种1、大肠杆菌2、枯草芽孢杆菌3、产气肠其他1、试管6组28个/组（每个

4、试管带一个德汉氏小管）2、平皿2组16个/组3、三角瓶2组8个/组四、实验步骤（一）准备实验器材及培养基（3人/组）1、淀粉培养基1瓶，培养皿三个2、糖发酵培养基7支3、M.R.,V.P培养基14支4、吲哚培养基7支（二）接种培养试验名称被接菌种A被接菌种B被接菌种C对照（管数）1.淀粉水解实验大肠杆菌1枯草芽孢杆菌1产气肠杆菌11支/每组不接种2.糖发酵大肠杆菌2枯草芽孢杆菌2产气肠杆菌21支/每组不接种3.MR试验大肠杆菌2枯草芽孢杆菌2产气肠杆菌21支/每组不接种4.VP试验大肠杆菌2枯草芽孢杆菌2产气肠杆菌21支/每组不接种5.吲哚试验大肠杆菌2枯草芽孢杆菌2金黄

5、色葡萄球菌21支/每组不接种接种方案（三）结果观察淀粉试验加入碘液观察葡萄糖/乳糖发酵试验直接观察。VP试验：去塞，加40％KOH15滴，振荡，再加等量α－奈酚，振荡，37℃振荡培养30min，观察。MR试验：加甲基红试剂2－3滴，观察。吲哚试验：加1ml乙醚（作用是萃取出吲哚）。振荡，静止片刻使分层，沿管壁慢慢加入吲哚试剂10滴，观察。五、实验结果及分析试验名称1.淀粉水解实验2.糖发酵3.MR试验4.VP试验5.吲哚试验大肠杆菌枯草芽孢杆菌产气肠杆菌金黄色葡萄球菌对照六、思考题1.糖发酵试验中，所安装的杜氏小管起什么作用？2.V.P试验与M.R.试验的最初作用物以及最

6、终产物有什么异同？为什么会出现最终产物的不同。3.吲哚是细菌分解哪一种氨基酸的产物？