基于CNPs的荧光DNA生物传感器对EV71的检测分析.pdf

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1、—７０２—ＣｈｉｎＪＬａｂＤｉａｇｎ，Ａｐｒｉｌ，２０１７，Ｖｏｌ２１，Ｎｏ．４文章编号：１００７－４２８７（２０１７）０４－０７０２－０３基于ＣＮＰｓ的荧光ＤＮＡ生物传感器对ＥＶ７１的检测分析迟旭１，盛传伦１＊，王锦鸿２＊（１．吉林大学中日联谊医院感染科，吉林长春１３００３３；２．南方医科大学第三附属医院呼吸科，广东广州５１００００）ＤＮＡ生物传感器是一种基于ＤＮＡ碱基互补ＣＴ－３’；Ｔ２（与ＰＥＶ７１互补且存在一个碱基错配的目配对原则的高灵敏度、高特异性的ＤＮＡ检测方法，标ＤＮＡ）：５’－ＧＣＴＡＧＡＧＡＴＴＧＴＣ

2、ＣＡＣＡＣ它通过检测探针ＤＮＡ与靶向ＤＮＡ杂交引起的可ＴＧＡＣＴ－３’；Ｔ３（与ＰＥＶ７１完全不互补的目标检测信号的改变，从而实现对靶向ＤＮＡ的检ＤＮＡ）：５’－ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴ［１，２］测。目前，已报道了多种基于不同检测信号的ＴＴ－３’。铟锡氧化物导电玻璃（ＩＴＯ）购自中国深圳［３］ＤＮＡ生物传感器，包括电化学生物传感器、压电南玻公司；实验所用水均为ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＭｉｌｌｉ－Ｑ纯化［４］过的超纯水（电阻率大于１８ＭΩ）。生物传感器和ＤＮＡ荧光传感器等。其中，荧光［５］ＤＮＡ传感器因具有检

3、测灵敏度高，操作简单，抗１．２主要仪器本实验所用仪器为扫描电子显微干扰能力强等优点，是目前研究最为广泛的ＤＮＡ镜（ＸＬ３０ＥＳＥＭＦＥＧ扫描电镜加速电压２０ｋＶ）；生物传感器。能量分散Ｘ射线光谱仪（ＥＤＸ）；透射电子显微镜碳纳米粒子（ｃａｒｂｏｎｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ，ＣＮＰｓ）为一（ＨＩＴＡＣＨＩＨ－８１００ＥＭ加速电压为２００ｋＶ）；Ｃａｒｙ种纳米材料，可作为一种荧光淬灭剂，具有淬灭不同５００ＳｃａｎＵＶ－Ｖｉｓ－ＮＩＲ光谱仪（Ｖａｒｉａｎ，ＨａｒｂｏｒＣｉｔ－［６］发射频率的荧光基团的能力。用纳米材料作为荧ｙ

4、，ＣＡ，ＵＳＡ）；ＺｅｔａＰＡＬＳ，ξ－电势分析仪光淬灭剂，就不用考虑荧光发射基团和淬灭基团的（ＢｒｏｏｋｈａｖｅｎＣｏ．）；荧光光谱用ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＬＳ５５匹配选择性。这种方法检测的原理是：由于这些结荧谱仪（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，ＵＫ）；ＲＦ－构富含π共轭结构，这样就会靠π－π堆积作用吸附５３０１ＰＣ荧光光谱仪（Ｓｈｉｍａｄｚｕ，Ｊａｐａｎ）。［７］含有自由碱基的单链ＤＮＡ（ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｒａｎｄｅｄＤＮＡ，１．３ＣＮＰｓ制备将干净的烧杯倒扣于蜡烛火焰ｓｓＤＮＡ）探针，同时与标记的

5、荧光基团发生电子转上收集蜡烛灰，将３ｍｇ收集到的蜡烛灰超生分散移而淬灭它的荧光，当目标ＤＮＡ出现的时候，由于于１２ｍｌ水／乙醇（１∶１）中。然后在３０００ｒｐｍ转与探针的杂交形成的双链ＤＮＡ不再有可利用的自速下离心２ｍｉｎ去除较大的蜡烛灰颗粒，然后将悬由碱基，这样就会从纳米材料上解吸附，荧光信号也浮液在６０００ｒｐｍ转速下离心２ｍｉｎ，收集黑色沉淀会相应地增强，从而实现检测。因此，现就基于物，将其分散于１２ｍｌ水／乙醇（１∶１）中备后用。应用电镜对制备的ＣＮＰｓ进行低倍率及高倍率的扫ＣＮＰｓ的ＤＮＡ荧光传感器对手足口病

6、毒ＥＶ７１描。ＤＮＡ检测的可行性及灵敏性进行分析。１材料与方法１．４样品制备在形貌表征前，电沉积后的导电氧化铟锡（Ｉｎｄｉｕｍｔｉｎｏｘｉｄｅ，ＩＴＯ）玻璃经过二次水以１．１主要试剂本实验所有核酸由生工生物工程（上海）股份有限公司及宝生物工程（大连）有限公司及乙醇冲洗以去掉物理吸附的支持电解质，然后用合成；所用核酸序列为ＰＥＶ７１（与手足口病毒ＥＶ７１氮气吹干。样品的制备通常是将２μｌ样品的悬浮有关的修饰有羧基荧光素ＦＡＭ荧光基团的单链液滴于ＩＴＯ表面，然后自然干燥。ＤＮＡ粉末经离心、水溶后，用Ｃａｒｙ５００ＳｃａｎＵ

7、Ｖ－Ｖｉｓ－ＮＩＲ光谱仪ＤＮＡ探针）：５’－ＦＡＭ－ＡＧＴＣＡＧＴＧＴＧＧＡＡＡＡ测其在２６０ｎｍ波长下的吸光度来定量。ξ－电势的ＴＣＴＣＴＡＧＣ－３’；Ｔ１（与ＰＥＶ７１完全互补的目标测量在ξ－电势分析仪上完成。用于荧光测定的每个ＤＮＡ）：５’－ＧＣＴＡＧＡＧＡＴＴＴＴＣＣＡＣＡＣＴＧＡ样品的体积均为４００μｌ。基金项目：吉林省社会发展领域重点科技支撑项目（２０１１４５６）１．５ＥＶ７１病毒ＤＮＡ序列的检测①分别在有／＊通讯作者无ＣＮＰｓ的情况下用ＰＥＶ７１（５０ｎＭ）对ＥＶ７１病毒中国实验诊断学２０１７年４月第２１

8、卷第４期—７０３—ＤＮＡ序列Ｔ１（３０ｎＭ和３００ｎＭ）进行检测，并同时体系对Ｔ１进行检测，并记录ＰＥＶ７１＋ＣＮＰｓ和ＰＥＶ７１检测ＰＥＶ７１、ＣＮＰｓ和ＰＥＶ７１＋ＣＮＰｓ。激发波长为４８０＋ＣＮＰｓ＋Ｔ１的荧光强度。ｎｍ，记录荧光发射光谱及在５２５ｎｍ波长下的荧光２结果强度。②应用ＰＥＶ７１＋ＣＮＰｓ体系，对与ＰＥＶ７１完全