经典开题报告.ppt

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1、研究生：Tim3/Tim3L信号通路激活在Hp免疫致病及Hp疫苗免疫防治中的作用及其机制导师：研究背景研究内容、研究目标及拟解决的关键问题研究方法、手段、技术路线及可行性分析统计学分析课题创新之处年度计划及预期进展实验条件及经费预算研究背景Hp在人群中感染率高，能引起多种严重疾病机体免疫反应在Hp感染致病和Hp疫苗免疫保护中均起重要作用研究Hp感染的免疫致病机制及Hp疫苗防治机制有重大意义Th免疫反应分泌IL-2、IFN-γ、TNF介导细胞免疫ThTh1Th2分泌IL-4、IL-5、IL-10、IL-13介导体液免疫反应Treg分泌IL-10、TGFβ免疫

2、抑制Th1Th2IFN-γ(-)(-)IL-4Th1与Th2关系Hp与Th反应Hp感染Th1占优势Th1和Th2失衡招募Treg感染持续存在Hp疫苗诱导Th1、Th2Th1和Th2失衡纠正Treg减少感染清除Tim家族Tim蛋白结构Tim-3是第一个被发现与T细胞反应有关的Tim家族成员表达在成熟Th1细胞膜上不表达在未成熟Th细胞、Th2细胞上包含Ig-V样结构域的信号肽、粘附素样结构域、跨膜区域、细胞内尾巴Tim-3激活后降低Th1反应Galectin-9是Tim-3的配体，主要表达在CD4+的T细胞Tim-3/Galectin-9通路的激活可导致Th

3、1细胞效应功能的终止Tim3和Tim3配体Tim-3与Th1TLR家族及配体TLR4信号通路我们前期研究发现阻断Tim-3信号通路可增加TLR4、MyD88表达、激活NF-κBTLR信号的负性调控因子SIGIRR可上调Tim-3的表达提示：Tim-3和TLR4信号通路可相互调控Tim3和TLR4我们的前期研究发现，阻断Tim-3信号通路后，Treg减少说明Tim-3信号通路在调节Treg控制炎症反应中起重要作用Treg和Tim-3Tim-3/Tim-3L是新发现的调节Th反应的核心环节，并且与TLR4信号通路和Treg密切相关TLR4信号通路Treg变化T

4、h反应Tim-3/Tim-3LHp致病和疫苗免疫保护我们的研究还发现Tim-3阻断提高Hp疫苗的免疫保护率，但并不降低Hp自然感染小鼠胃黏膜内Hp定植密度加剧Hp疫苗接种小鼠和Hp感染小鼠胃黏膜炎症程度提示Tim-3信号通路参与Hp感染的免疫致病和Hp疫苗的免疫保护作用问题：Tim-3信号通路激活，将会对Hp感染和Hp疫苗免疫产生何种影响？目前尚不清楚体外研究体内研究研究内容研究Tim-3信号通路激活对Hp感染和Hp疫苗接种小鼠Th1和Th2免疫反应、TLR4信号通路及Treg的影响，以及这些影响对Hp感染引起的的炎症反应和Hp疫苗免疫保护作用之间的关系体

5、内研究Hp感染和Hp疫苗接种小鼠给予Tim-3L，观察以下指标：小鼠脾细胞中Tim-3阳性细胞数量的变化胃黏膜局部Tim-3表达、Treg和几个有代表性的Th1（IFN-γ、LI-12）和Th2（IL-4、IL-10）细胞因子含量的变化胃黏膜局部TLR4信号通路的几个中间环节和下游分子（TLR4、MyD88、NF-κB）的变化。胃黏膜内Hp感染、炎症程度情况观察指标淋巴细胞对Hp刺激的增殖反应Tim-3阳性细胞的数量培养上清液中Th1和Th2细胞因子含量CD4+效应T细胞中TLR4信号通路的几个中间环节和下游分子的变化比较它们与未处理组的差异体外研究观察小

6、鼠的脾淋巴细胞用Tim-3L(Galectin-9)预处理后与Hp共培养后：阐明Tim-3信号通路激活对Hp感染和Hp疫苗接种小鼠Th1和Th2免疫反应、TLR4信号通路及Treg的影响，以及这些影响对Hp感染引起的的炎症反应和Hp疫苗免疫保护作用之间的关系研究目标阐明Hp感染和疫苗接种后Tim-3/Tim-3L信号通路的变化及与疾病和疫苗保护机制的关系明确通过对Tim-3/Tim-3L信号通路的调控可否减轻Hp相关性疾病的严重程度和提高疫苗的免疫保护作用拟解决的关键科学问题研究方法和步骤体内研究未经处理组:①Hp感染组②Hp疫苗组③对照组Tim3配体处理

7、组：①Hp感染组②Hp疫苗组③对照组体外研究未经处理组：①Hp刺激组②空白组Tim3配体处理组：①Hp刺激组②空白组试验分组Hp标准菌株SS1接种于含7.5%无菌绵羊血的空肠弯曲菌选择性培养琼脂基础上，微需氧条件下（O25%、CO210%、N285%）37℃培养2-3天Hp菌液行超声粉碎后，分别与霍乱毒素（CT）和壳聚糖构建以CT和壳聚糖为佐剂的Hp疫苗HP培养及疫苗制备6-8周龄的SPF级的BALB/C小鼠，给予含109/ml的SS1Hp菌液，0.5ml/只灌胃，隔日1次，共5次。末次灌胃4周后，取10只小鼠处死，取胃黏膜进行病理检查和Hp培养，确定Hp

8、感染模型的建立Hp感染小鼠模型6-8周龄的SPF级的BALB/C小