紫外分光光度法.ppt

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1、紫外-可见分光光度法讲议第一节紫外-可见分光光度法研究物质在紫外光、可见光光区的分子吸收光谱的分析方法称为紫外-可见分光光度法。紫外—可见分光光度法是利用某些物质的分子吸收在200~800nm光谱区的辐射来进行分析测定的方法，广泛用于无机和有机物质的定性和定量测定。第二节光吸收基本定律和吸收系数1.光吸收基本定律：比尔—郎伯（Beer—Lambert）定律为光吸收基本定律，是分光光度分析的理论基础。Lambert于1730年提出了光强度与吸收介质厚度的关系。1852年Beer提出了光强度与吸收介质中吸光物质浓度之间的关系。透光率：单色光通过一物质的溶液时透过光的强度（I）与入射光的强度（

2、I0)之比称为透光率或透射比（T）。T＝I／I0吸收度：透光率的负对数称为吸收度或光密度。A=log1/T=－logT郎伯（Lambert）定律:当溶液浓度不变时，吸收度与溶液的液层厚度成正比。比尔（Beer）定律：当溶液液层厚度不变时，吸收度与溶液的浓度成正比。郎伯—比尔（Lambert—Beer）定律:单色光通过一物质的溶液时，如果入射光的强度不变，溶液吸收度（A）与溶液浓度（C）和液层厚度（L）成正比。A=log1/T=ECL式中E为吸收系数2.吸收系数：定义：吸光物质在单位浓度和单位液层厚度时的吸收度。表示方法：（1）百分吸收系数（E）：当溶液浓度（C）为1%（g/ml），光路长

3、度（L）为1cm时，相应的吸收度为百分吸收系数，以E表示。E=A/C(%)×L(cm)中国药典规定的吸收系数即为E。（2）摩尔吸收系数（ε）：当溶液的浓度（C）为1mol/L,光路长度（L）为1cm时，相应的吸收系数为摩尔吸收系数，以ε表示。ε=A/C(mol/L)×L(cm)ε和E的关系是：ε=E×分子量/10E=ε×10/分子量第三节.分光光度计组成基本原理框图：光源单色器吸收池检测器讯号处理及显示器（一.）光源可见光区，常用钨灯做为光源，可使用的范围在340~2500nm。紫外光区，常用氢灯或氘灯做为光源。可使用的范围在160~375nm。仪器必须配有稳压装置。（二.）单色器单色器

4、是能从光源辐射的复合光中分出单色光的光学装置，其主要功能：产生光谱纯度高的波长且波长在紫外可见区域内任意可调。能产生单色光的色散元件主要是:棱镜和光栅。（三.）吸收池：吸收池用于盛放分析试样，一般有石英和玻璃材料两种。为减少光的损失，吸收池的光学面必须完全垂直于光束方向。在高精度的分析测定中（紫外区尤其重要），吸收池要挑选配对。因为吸收池材料本身的吸光特征以及吸收池的光程长度的精度等对分析结果都有影响。玻璃吸收池因为能吸收紫外光，故只能用于320nm以上的可见光区。石英吸收池因不吸收紫外光而常用于3０0nm以下的紫外光区，但也可用于可见光区。最常用的光路长度为:1cm的吸收池。（四.）检

5、测器：检测器的功能是检测信号、测量单色光透过溶液后光强度变化，是将光信号转换成电信号的一种装置。紫外－可见分光光度计的校正波长校正－用汞灯、氘灯、钬玻璃吸光度准确度－用重铬酸钾的硫酸溶液杂散光检查－1%碘化钠溶液、5%亚硝酸钠溶液第四节样品测定操作方法一.吸收系数测定（性状项下）:按各该品种项下规定的方法配制供试品溶液，在规定的波长测定其吸收度，并计算吸收系数，应符合规定范围。二.鉴别及检查:按各该品种项下的规定，测定供试品溶液在有关波长处的最大及最小吸收，有的并须测定其各最大吸收峰值或最大吸收与最小吸收的比值，均应符合规定。三.含量测定:1.对照品比较法:按各该品种项下规定的方法，分别

6、配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分标示量的（100士10）％以内，用同一溶剂，在规定的波长处测定供试品溶液和对照品溶液的吸收度。2.吸收系数法按各该品种项下配制供试品溶液，在规定的波长及该波长士２nm处测定其吸光度，按各该品种在规定条件下给出的吸收系数计算含量。采用吸收系数法应对仪器进行校正后测定。3.计算分光光度法采用计算分光光度法的品种，应严格按各该品种项下规定的方法进行，用本法时应注意：有一些吸收度是在供试品或其成分吸收曲线的上升或下降陡坡部处测定，影响精度的因素较多，故应仔细操作，尽量使测定供试品和对照品的条件一致，若该品种不用对照品

7、，如维生素A测定法（见中国药典附录），则应在测定前对仪器作仔细的校正和检定第五节注意事项1.试验中所用的量瓶，移液管均应经检定校正、洗净后使用。2.使用的石英吸收池必须洁净。吸收池在测定样品溶液前必须加以校正。取吸收池时，手指拿毛玻璃面的两侧。装盛样品溶液以池体积的4／5为度。使用挥发性溶液时应加盖。吸收池透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，检视应无残留溶剂。吸收池放入样品室时应注意每次放入方向相同。吸收池使用后应用溶剂及水冲洗干净，