实验项目：黄酮提取.ppt

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1、实验项目：木芙蓉花中有效成份提取与性能研究主讲教师：倪明一、目的与要求1．了解植物中有效成份的药用价值。2．掌握植物中有效成份的提取及其测定方法。3．掌握抑制亚硝化反应的操作与方法。二、实验原理与相关知识黄酮类化合物泛指两个具有酚羟基的苯环（A-与B-环）通过中央三碳原子相互连结而成的一系列化合物，其基本母核为2-苯基色原酮。是一大类以苯色酮环为基础的酚类化合物。植物中由苯丙氨酸产生的肉桂酰辅酶A，经碳链延长环化生成的查耳酮，再衍生成的各种α-苯基衍生物。二、实验原理与相关知识黄酮类化合物结构中常连接有酚羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基等官能团。此外，它还常与糖结合成

2、苷。天然黄酮类化合物多以苷类形式存在，并且由于糖的种类、数量、联接位置及联接方式不同可以组成各种各样黄酮苷类。组成黄酮苷的糖类包括单糖、双糖、三糖和酰化糖。黄酮苷固体为无定形粉末，其余黄酮类化合物多为结晶性固体。黄酮类化合物不同的颜色为天然色素家族添加了更多色彩。这是由于其母核内形成交叉共轭体系，并通过电子转移、重排，使共轭链延长，因而显现出颜色。黄酮苷一般易溶于水、乙醇、甲醇等极性强的溶剂中；但难溶于或不溶于苯、氯仿等有机溶剂中。糖链越长则水溶度越大。黄酮类化合物因分子中多具有酚羟基，故显酸性。酸性强弱因酚羟基数目、位置而异。黄酮类化合物广泛存在于天然产物中，大

3、多具有明显的抗炎、抗菌、生物抗氧化性、抗衰老、降血脂、治疗心血管疾病等功能。其中有些可用于心血管病的治疗。二、实验原理与相关知识植物单宁(Vegetabletannins)，又称植物多酚(PlantPolyphenol)为多羟基苯，如苯二酚、苯三酚等，是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物。在维管植物中的含量仅次于纤维素、半纤维素和木质素，广泛存在于植物的皮、根、叶、果中，含量可达20%。植物单宁是植物的次生代谢产物，属于天然有机化合物。常是植物及微生物中产生的酚类次生代谢产物。具有抗氧化性、抗肿瘤、抗动脉硬化、防冠心病与中风等心脑血管病以及抗菌等多种生理功能，是

4、自然界和人类的“健康卫士”。2l世纪随着抗氧化剂理论及研究工作的深入，以及消费者对食品安全性意识的提高，天然抗氧化剂的应用越来越受到人们的重视，回归大自然已是目前一个大趋势。木芙蓉（HibiscusmutabilisL.）为锦葵科植物，又名拒霜花、木莲、醉芙蓉，为落叶灌木或小乔木。其花大色艳，花色一日三变，在寒凉的深秋傲霜怒放，观赏价值极佳。其花、叶、根富含生化药物成分，是极优良的中药材。中医认为，木芙蓉性平味辛，有清热、凉血、解毒、消肿、排毒之功效，适用于肺热咳嗽、月经过多、白带过多、痈疽肿毒、疔疮、水火烫伤等疾病。《本草纲目》言其“治一切大小痈疽，肿毒恶疮，消

5、肿，排脓，止痛”。木芙蓉花、叶中含有多酚、黄酮类化合物。二、实验原理与相关知识1.测定总黄酮的原理:在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在条件下,黄酮类化合物先与亚硝酸钠发生氧化还原反应，再加硝酸铝络合，最后加氢氧化钠溶液使黄酮类化合物开环，生成2-羟基查耳酮而显红橙色,在510nm波长处有吸收峰且符合定量分析的比尔定律,一般与芦丁标准系列比较定量（它的显色原理发生在黄酮醇类成分邻位无取代的邻二酚羟基部位,不具有邻位无取代邻二酚羟基的黄酮醇类成分加入上述试剂时是不显色的）。二、实验原理与相关知识2.多酚测定原理:总多酚的测定采用Folin-Ciocalteu法测定总多酚含量

6、，其反应原理为酚类化合物在碱性条件下可以将钨钼酸还原，生成蓝色的化合物，颜色的深浅与酚类化合物含量呈正相关，在波长760nm左右有最大吸收，一般与没食子酸标准系列比较定量 。二、实验原理与相关知识3.总黄酮对亚硝酸钠清除率的测定亚硝酸钠在弱酸性条件下，与对氨基苯磺酸重氮化，然后再与盐酸萘乙二胺偶合生成红色化合物，用分光光度计测出该化合物的吸光度，就可知道反应液中亚硝酸钠含量多少。据此可以通过测定相同条件下亚硝酸钠含量的变化反映总黄酮清除能力的强弱，亚硝酸钠含量少，总黄酮清除能力就强，反之则弱。二、实验原理与相关知识4.总黄酮对亚硝胺合成阻断率的测定二甲胺与亚硝酸钠

7、在模拟人体胃液的条件下(pH3.0，温度37℃)，可适宜地生成二甲基亚硝胺。当往样品溶液中依次加入二甲胺与亚硝酸钠时，样品溶液优先同亚硝酸钠作用，使得二甲胺不能与亚硝酸钠反应，达到阻止亚硝胺生成的目的。据此可以通过比较相同条件下生成亚硝胺量的多少反映总黄酮阻断能力的强弱，生成亚硝胺量少，总黄酮的阻断能力就强，反之则弱。在紫外灯照射下，二甲基亚硝胺可分解成二甲基仲胺和亚硝酸根，亚硝酸根与对氨基苯磺酸重氮化后，再与1-萘胺偶合生成红色化合物，用分光光度计测出该化合物的吸光度，就可知道上述反应液中亚硝胺含量多少。三、仪器与试剂（一）实验室提供下列仪器和试剂1、仪器：电子

8、分析天平；