附录4　常用的消毒灭菌操作方法.pptx

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1、微生物的实验室培养------消毒灭菌操作方法嘉峪关市第一中学刘宗巨1.何为无菌技术？无菌技术包括哪些方面？2.什么是消毒？灭菌？两者有何区别？3.常用的消毒与灭菌的方法有哪些？有何要求？4.请说出干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法的操作步骤。一、无菌技术阅读教材P15-P16相关内容，回答以下问题：1.一.无菌技术防止外来杂菌污染a.目的：b.方法：消毒与灭菌消毒与灭菌的概念和区别？是指在微生物培养操作过程中，防止一切微生物侵入污染的操作技术。1.获得纯净培养物的关键是什么？（１）消毒定义：利用较为温和的化学或物理方法杀死物体表

2、面或内部的部分微生物的过程。不包括芽孢和孢子。2.消毒与灭菌的概念及两者的区别（2）灭菌的定义：以强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌之过程。灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。消毒灭菌理化因素温和强烈结果消灭表面微生物，不包括芽孢和孢子杀灭所有微生物，包括芽孢和孢子适用范围无法灭菌或无菌要求不高，只要求杀灭和清除致病微生物严格要求无菌，得到纯净培养物a.煮沸消毒法:100℃煮沸5-6minb.巴氏消毒法：70-75℃下煮30mi

3、n或80℃下煮15minc.化学药剂消毒法:用70%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源，石炭酸或煤酚皂空气消毒d.紫外线消毒……(1)消毒的方法：3.常用的消毒与灭菌的方法a.灼烧灭菌(2)灭菌的方法：b.干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。c.高压蒸汽灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.(一)干热灭菌的操作方法1.装入待灭菌的物品二.常用的消毒灭菌操作方法2.灭菌3.降温4.开箱取物1.取桶加水（二）高压蒸汽灭菌的操作方法2.装入待灭菌的物品3.加盖,拧紧螺栓4.加热灭菌5.降温取物（三）紫

4、外线灭菌的操作方法1.只适用于表面灭菌和空气灭菌.2.10m2小型接种室,2m高位置,2只30W紫外灯,开灯照射30min.3.照射前,适量喷施化学抑菌剂.常见消毒灭菌操作方法比较方法特点干热灭菌高压蒸汽灭菌灼烧灭菌紫外线灭菌化学药剂消毒原理使菌体内蛋白质变性使菌体内蛋白质变性使菌体内蛋白质变性破坏DNA结构使菌体内蛋白质变性，或通过氧化作用使酶失去活性操作方法160-170℃下灭菌1-2h压力为100kpa，温度为121℃，灭菌15-30min酒精灯火焰紫外灯照射30min酒精擦拭双手，氯气消毒水源应用范围玻璃器皿，金属

5、工具培养基及容器接种工具，试管口，接种瓶口接种室，操作台双手，水源，地面，空气优缺点耐高温器皿，不宜和蒸汽接触的物品，易焦糊杀菌能力最强，穿透力强，易潮湿物品快速消毒面积大，只能杀灭表面菌体方便，需要选择适宜的化学药剂相同温度下，干热灭菌法和湿热灭菌法相比较，湿热的灭菌效果较干热好，使用也更普遍。湿热较干热灭菌效果好的原因有： ①热蒸汽对细胞成分的破坏作用更强。水分子的存在有助于破坏维持蛋白质三维结构的氢键和其他相互作用弱的键，更易使蛋白质变性。蛋白质含水量与其凝固温度成反比。湿热灭菌中的菌体蛋白质吸收水分，因此较同一温度

6、的干热空气中的菌体蛋白质更易凝固。②蒸汽存在潜热．当气体转变为液体时可放出大量热量，故可迅速提高灭菌物体的温度。因而湿热灭菌比干热所要温度低，如在同一温度下，则湿热灭菌所需时间比干热短。③湿热的穿透力比干热大，使深部也能达到灭菌温度，故湿热比干热收效好。最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑

7、料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。培养基分装完毕以后，在管口上加一个棉塞。棉塞能防止杂菌污染，保证通气良好，加棉塞时，应使棉塞长度的2／3在试管口内，如上图所示。加棉塞高压蒸气灭菌的原理是A．高压使细菌DNA变性B．高压使细菌蛋白质凝固变性C．高温烫死细菌D．高温使细菌DNA变性B关于灭菌和消毒的不正确的理解是A．消毒和灭菌实质上是相同的B．灭菌是指杀死环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子C．接种环用烧灼的方法灭菌D．常用灭菌方法有加热法、过滤法、红外线法、化学药品法A1.无菌技术除了用来防止实

8、验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。旁栏思