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时间:2020-01-26
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1、ElisaKit使用方法检测原理:本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人IL-4单抗包被于酶标板上,标本和标准品中的IL-4会与单抗结合,游离的成分被洗去。加入生物素化的抗人IL-4抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。生物素与亲和素特异性结合;抗人IL-4抗体与结合在单抗上的人IL-4结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物,若反应孔中有IL-4,辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色,加终止液变黄。在450nm处测OD值,IL-4浓度与OD450值之间呈正比,可通过绘制标准曲线求出标本中IL-4的浓度。试剂盒组成:1.抗体预包被酶标板(8×12或8×6)2.冻干标准品(2
2、/1支;0.5ng/支)3.标准品和标本稀释液(橙盖瓶)(1瓶;20ml/12ml)4.浓缩生物素化抗体(紫盖瓶)(1支)5.生物素化抗体稀释液(蓝盖瓶)(1瓶;16ml/10ml)6.浓缩酶结合物(棕盖瓶)(1支)7.酶结合物稀释液(紫盖瓶)(1瓶;16ml/10ml)8.浓缩洗涤液20×(白盖瓶)(1瓶;50ml/25ml)9.显色底物(TMB)(棕盖瓶)(1瓶;12ml/6ml)10.反应终止液(红盖瓶)(1瓶;12ml/6ml)11.封板胶纸(6/3张)12.产品说明书(1份)标本收集:1.收集血液的试管应为一次性的无热原,无内毒素试管。2.血浆抗凝剂推荐使用EDTA。避免
3、使用溶血,高血脂标本。3.标本应清澈透明,悬浮物应离心去除。4.标本收集后若不及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃,-70℃电冰箱内,避免反复冻融,3-6月内检测。5.如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值,请根据实际情况,做适当倍数稀释(建议做预实验,以确定稀释倍数)。注意事项:1.试剂盒使用前请保存在2-8℃。复溶后的标准品应分装后,将其放在-20~-70℃贮存。2.浓缩生物素化抗体,浓缩酶结合物体积小,运输中颠簸和可能的倒置,会使液体沾到管壁或瓶盖。因此使用前请用手甩几下或1000转/分离心1分钟,以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前,请用移液器小心吹打4-5
4、次使溶液混匀。3.从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象,微加热至40℃使结晶完全溶解后再配制洗涤液。(加热温度不要超过50℃)使用时洗涤液应为室温。4.若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装,将其放在-20~-70℃贮存。避免反复冻融。5.不同批号的试剂盒组份不能混用(洗涤液和反应终止液除外)。6.充分轻微混匀对反应结果尤为重要,最好使用微量振荡器(使用最低频率),如无微量振荡器,可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。7.在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测。8.试验中所用的试管和吸头均为一次性使用,严禁在不同的液体之间混用!否则将影响试验结果。9.试验中请穿着试验
5、服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液标本时,请按国家生物试验室安全防护条列执行。检测前准备工作:1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒,以平衡至室温。2.将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:20)。未用完的放回4℃。3.标准品:加入标准品/标本稀释液0.5ml至冻干标准品中,静置15分钟,待其充分溶解后,轻轻混匀(浓度为1000pg/ml)。然后根据需要进行稀释。(建议标准曲线使用以下浓度:1000、500、250、125、62.5、31.25、15.6、0pg/ml)。复溶标准品原液(1000pg/ml)若未用完请分装后放入-20℃以下电冰箱内保存,保存两个月。已稀释的
6、标准品请废弃。4.生物素化抗体工作液:按当次试验所需要得用量,使用前20分钟,以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:30)成工作浓度。当日使用。若实验次数过多导致生物素化抗体量不足,可向我们公司单独购买生物素化抗体。(须提供抗体批号)5.酶结合物工作液:按当次试验所需要得用量,使用前20分钟,以酶结合物稀释液稀释浓缩酶结合物(1:30)成工作浓度。当日使用。若实验次数过多导致浓缩酶结合物量不足,可向我们公司单独购买浓缩酶结合物。(须提供酶结合物批号)洗涤方法:1.自动洗板机:要求注入的洗涤液为350ul,注入与吸出间隔15-30秒。洗板5次。2.手工洗板:甩尽孔内液体,在洁
7、净的吸水纸上拍干,每孔加洗涤液350ul,静置30秒后甩尽液体,在厚迭吸水纸上拍干。洗板5次。操作步骤:1.从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条,未用的板条和干燥剂请放回铝箔袋内压实自封条,密封口袋,放回4℃。2.空白孔加标准品和标本稀释液,其余相应孔中加标本或不同浓度标准品(100ul/孔),用封板胶纸封住反应孔,36℃孵箱孵育90分钟。3.提前20分钟准备生物素化抗体工作液。4.洗板5次。5.空白孔加生物素化抗体稀释液,其余孔加入生物素化抗体工作液(100ul
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