第六讲 抗生素质量控制.ppt

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1、第三章抗生素第五节抗生素质量控制一性状头孢哌酮钠：白色或类白色的结晶或粉末；二鉴别试验呈色反应：与羟胺作用生成羟肟酸，与铁离子呈色。类似于肽键反应，双缩脲反应和茚三酮反应钾钠离子的焰色反应普鲁卡因青霉素有芳伯氨基，可以发生重氮化-偶合反应，生成红色染料沉淀。光谱法：包括红外吸收光谱（IR)和紫外吸收光谱(UV)色谱法:与对照品的高效液相色谱（HPLC)和薄层色谱(TLC)的保留时间和比移值一致【鉴定】沉淀反应取本品10mg，加硝酸0.5ml使溶解，加水0.5ml，火焰加热（灼烧）2分钟，放冷，滴加硝酸银试液，即生成白色凝乳状沉淀三一般项目检查抗生素药物的检查

2、项目包括：①鉴别试验②异常毒性试验③无菌试验④热原试验⑤降压试验⑥酸碱度试验⑦水分测定⑧溶液澄清度检查⑨效价测定⑩其他检测（抗生素组分、有关物质、比重度、熔点、晶型、溶媒残留量、重金属、溶出度等）。异常毒性系将一定剂量的供试品溶液注入小鼠体内或口服给药，在规定时间内观察小鼠死亡情况，以判定供试品是否符合规定的一种方法。热原将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。采用“鲎(hou)试剂（内毒素检测试剂）”法检查。降压物质、升压物质无菌试验：指检查药品、敷料、缝合线、无菌器具及适用于药

3、典要求无菌检查的其他品种是否无菌的一种方法。微生物限度检查：检查非规定灭菌制剂及其原、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。杂质毒性杂质非毒性杂质溶出度不溶性颗粒【杂质检查】--液相色谱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐溶液-乙腈（40：60）为流动相；波长为215nm。按红霉素C、红霉素A、红霉素B的顺序出峰。另取红霉素标准品适量，130℃加热破坏4小时，液相色谱分析。记录色谱图至红霉素A保留时间的5倍。按红霉素C、红霉素A、杂质1、红霉素B、红霉素烯醇醚峰的顺序出峰。杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（5

4、.0%）。四、含量测定碘量法：采用剩余碘量法测定，以标准对照法计算含量。电位配位滴定法：青霉素碱水解产物可以与二价金属离子形成配合物，故采用碱水解后用硝酸汞进行滴定。紫外可见分光光度法：青霉烯酸在320nm~360nm有强吸收，外标法测吸光度。高效液相色谱法：发展最快的分析方法，使用反相的HPLC法，以外标法作标准曲线计算含量。（1）含量测定—液相色谱分别加甲醇溶解，用磷酸盐缓冲盐（pH7.0）-甲醇（15︰1）定量稀释制成溶液，分别作为供试品溶液和标准品溶液；精密量取供试品溶液与标准品溶液各20ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试

5、品中红霉素A的含量。药典规定：按无水物计算，不得少于88.0%。（2）、抗生素类药物含量的理化测定法抗生素类药物含量分析测定方法分为理化方法和生物学方法.理化方法以化学、物理化学方法测定主药含量，准确度高、简单、快速，但不一定代表生物效价，且易受杂质干扰。生物学方法主要是通过测定抗生素抑菌或杀菌的能力来表达其效价，与临床效果一致，灵敏度高，干扰物质少，但操作繁琐、培养时间长、测定误差大。例青霉素钠Ch.P（2000）【鉴别】（1）取本品与已知含量的青霉素适量，分别加水制成每1ml中约含50mg的溶液，各取1ml，加入不少于200单位的青霉素酶溶液1ml,在3

6、7℃灭活1小时后，取灭菌滤纸片，分别用上述溶液浸湿后，用滤纸吸去多余的液体，置摊布金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]的培养基上。在37℃培养约16小时后均无抑菌作用，而用同一方法检查未经青霉素酶灭活的溶液均有抑菌作用.例1青霉素含量的测定青霉素在水溶液中经水解后，产生青霉噻唑酸，可用酸碱滴定法测定。或用直接滴定法，或用逆滴法进行测定，最后均以碱标准溶液的消耗量来计算青霉素的含量。终点观察：用目视指示剂或电位滴定均可。温度对指示剂的变色范围有影响。碱性指示剂，温度升高时，对氢离子的灵敏度降低，变色范围偏向较低的pH值，如甲基橙在室温时为pH3.1～4.

7、4，在100℃时，移到2.5～3.7。酸性指示剂对温度的影响不太敏感。指示剂的用量不宜多，过多时，因指示剂本身也消耗酸或碱，变色较慢。在水溶液中，大部分羧酸在pH约8.4时中和，一般可用酚酞指示剂（无色到红色），也可采用百里酚酞（无色到蓝色）或百里酚蓝（黄色到蓝色）等。滴定剂的选择，一般选用氢氧化钠或氢氧化钾标准溶液作滴定剂。标准碱液一般采用新沸冷却蒸馏水进行稀释制备。贮存标准碱液的容器要密封，以免吸收二氧化碳而影响碱液质量。例2青霉素钠的含量测定精密称取本品约0.3～0.4g，加新沸过的蒸馏水20mL使其溶解，加0.01mol/L氢氧化钠液中和后，精密加0

8、.1mol/L氢氧化钠液25mL，95℃左右水浴20