本课题现有工作基础：.docx

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1、本课题现有工作基础:在本课题组前期的新型Aurora激酶的小分子抑制剂的发现阶段，我们分别以AT-9283.VX-680和ZM447439为先导化合物，运用药物设计的基本原理，分别设计合成了毗哇■苯并咪哇类、4■苯胺基喀唳类和4■芳香胺基喳哇咻类共50个目标化合物，均未见文献报道。所有化合物的结构均经1H・NMR、13C-NMR、IR、MS和EA确证。我们对这些化合物进行了初步的体内外的药效及安全性评价，最终得到化合物AM-004可作为候选药物做进一步临床前研究，下面简述AM-004的发现过程。AM-004是以AT-9283为先导化合物，在分析其构效关系的基础上，运用药物设计的基本

2、原理改造而得到。AT-9283是AstexTherapeutics公司基于分子片段药物发现方法研发的Aurora激酶小分子抑制剂，现已处于临床II期阶段。AT-9283是一个抑制苏氨酸/苏氨酸激酶（包括AuroraA和B、JAK・2和3,Tyk2、RSK2）多靶点抑制剂，其IC50均低于10nM,同时AT-9283对表达野生型BCR-ABL或突变型BCR-ABL或其突变体的人类细胞株有显著的抑制细胞增殖活性。该化合物临床I/I【用于治疗实体瘤和白血病。临床I期用于治疗难愈白血病的结果在2008ASCO大会上公开，在用药患者中发现，AT-9283能够诱导组蛋白H3的磷酸化（抑制Aur

3、oraB）,至今在AT-9283的临床研究中，没有发现严重的不良反应。AT-9283目标分子的设计：以AT-9283为先导化合物进行药物设计，运用连接变化法，环合原理和生物电子等排原理等药物设计的基本方法，酰胺或淼基团通过环合，得到五元或六元杂环，杂环起到“拟酰胺”或“拟豚啲构像限制的作用（如图1所示）。HHq。HNH图1目标化合物的设计基于以上设计思想拟设计毗哇■苯并咪哇母核类目标化合物，共计15个（见表2）o表2毗哇.苯并咪哇母核类目标化合物CompdR1R2AM-001AM-002AM-003AM-004AM-005AM-006AM-007AM-008HNAM-009AM-0

4、10AM-011HNAM-012AN-001N■A/厂NJ-二S二oAN-002AN-004FNClo二s二oFNCl目标化合物初步体内外生物活性测试:(1)对目标化合物筛选出具有Aurora激酶抑制活性的小分子抑制剂Aurora激酶在有丝分裂过程中起重要作用，尤其是AuroraB调控胞质分裂过程，抑制AuroraB激酶，将导致该过程不能顺利进行，将形成多倍体细胞。依据此特点，将化合物与肿瘤细胞共培养48小时后，观察肿瘤细胞的多倍体形成情况，筛选出活性较好的化合物。如表3所示，AM-004(结构见表2)具有较强的诱导多倍体形成的能力，推断其可能具有Aurora激酶抑制活性的小

5、分子化合物。为确证AM-004为Aurora激酶抑制剂，利用均相时间分辨荧光法检测体外的激酶抑制活性，结果显示，AM-004是高效的Aurora激酶抑制剂,对AuroraA/B/C的IC50分别为35.91、68.46、73.01nM。表3化合物(部分)诱导HCT116和HT29细胞形成多倍体HCT116形成多倍体时HT29形成多倍体时化合物编号分子量化合物浓度(nM)化合物浓度(nM)AM-001424250-200>250AM-002456>250>250AM-003601>250>250AM-004545」5100-75150-100AM-005454250-200250-2

6、00AM-006599>250>250AM-007339>250>250AM-008371>250>250AM-009516>250>250AM-011442.15250-200>250AM-012587.2>250>250AN-001444>250>250AN-002359>250>250（2）AM-004的抗肿瘤效果初步评价首先在细胞内评价AM-004的药效，选用不同组织部位的肿瘤细胞与AM-004共培养，在72h后检测细胞活力，计算IC50。从表4可以看出，AM-004对结肠癌HCT116细胞和肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用最强，IC50值分别是66.8和104.8nM

7、。随后通过细胞计数（图la）和克隆形成实验（图2b）进一步检测抑制肿瘤细胞的增值效果，与细胞活力实验相符。裸鼠移植瘤实验（图2c）显示，AM-004对HCT116和HT29的抑制作用显著，腹腔给药剂量为2.5,5和7.5mg/kg,18天后，7.5mg/kg剂量组对HCT116和HT29肿瘤生长抑制率分别为69%和63%。给药期间体重减少在10%以内。表4AM-004对肿瘤细胞生长的抑制作用CelllineTissueoriginp53statusIC50(nM)aH