土壤中放线菌的筛选即其抗菌谱的测定实验论文

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1、SHANDONGＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ　ＯＦ　ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ实验论文土壤中产抗生素放线菌的筛选及抗菌谱的测定作者：天奇6666662017年06月9目录摘要31、引言42、实验材料与方法42.1材料42.1.1土壤样品42.1.2培养基42.2实验方法及步骤52.2.1放线菌的分离及最佳土壤稀释浓度的选择52.2.2放线菌纯化培养52.2.3保存备用菌株52.2.4供试菌液配置52.2.5进行拮抗试验53、实验结果与分析63.1实验结果表（表二）63.2实验照片63.3实验结果分析74、结论与讨论74.1结论74

2、.2讨论85、参考文献89摘要本次实验选取了学校八个采样点进行采样，通过土壤悬液稀释进行固体培养基涂布培养，分离纯化出对其他微生物有拮抗作用的放线菌，使用牛肉膏蛋白胨固体培养基和PDA培养基进行抗菌谱测定。本次实验以双管齐下的方式分别进行主实验与次实验，保证了实验重复性并极大节省了时间，实验过程分两批进行，主实验通过培养细菌与真菌菌液，涂布牛肉膏蛋白胨固体培养基平板分离出了五珠无拮抗作用的放线菌，次试验通过点接的PDA培养基的方式分离出一株对枯草芽孢杆菌有抗性而对黑曲霉有轻微抗性的放线菌菌珠。关键词：土壤、放线菌、拮

3、抗作用91、引言土壤----作为生物生存一种基本的资源，其中蕴藏着巨大的微生物资源，特别是以能产生多样的次级代谢产物而著称的放线菌，研究土壤沉积微生物，不仅可以发现新的放线菌资源，同时也可能发现新型活性产物，在医药、食品、化工、环保等行业意义巨大。放线菌是具有巨大实用价值的一类微生物,目前从微生物中发现的大约8000种生物活性物质中,近70%是由放线菌产生的。放线菌是一群革兰氏阳性、高(G+C)mol%含量(>55%)的细菌。放线菌因菌落呈放线状而的得名。它是一个原核生物类群，在自然界中分布很广，主要以孢子繁殖，其次

4、是断裂生殖。与一般细菌一样，多为腐生，少数寄生。2、实验材料与方法2.1材料2.1.1土壤样品理工大西校区西门附近校区内随机取8个采样点,采样点的选择以农田土壤、经常疏松的的种植土壤以及含有机质较为丰富的为主。2.1.2培养基高氏合成一号培养基：溶液与试剂、可溶性淀粉、NaCI、KNO3、K2HPO493H2OMgSO4．7H2O、FeSO4．7H2O，琼脂，1mol/LNaOH,1mol/LHCI。仪器与其他用具：试管，锥形瓶，烧杯，量筒，玻璃棒，培养基分装器，天平，高压蒸汽灭菌器，PH试纸，棉花，牛皮纸，麻绳，纱

5、布等牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏、蛋白胨、NaClPDA培养基：新鲜土豆；琼脂；葡萄糖、电磁炉；锅（带盖）；漏勺；刀、烧杯纱布；玻璃棒；天平；称量纸；蒸馏水2.1.3供试菌种大肠杆菌、黑曲霉、金黄葡糖球菌、啤酒酵母菌、枯草芽孢杆菌、毛霉（菌种来自实验室课程实验老师）2.2实验方法及步骤2.2.1放线菌的分离及最佳土壤稀释浓度的选择称取5g处理后土壤样品,制成分别稀释成10^-3、10^-4、10^-5倍的土壤样品悬浮液,充分振荡,静置20min后,分别将适量上清液吸入高氏合成一号平板上,并用三角环涂均匀,置于28℃恒温

6、组织培养箱内培养2~4d,观察和鉴定各类微生物的出现情况,确定最佳土壤稀释浓度,并将其中的放线菌挑出。2.2.2放线菌纯化培养将已经分离的放线菌纯化在高氏一号固体培养基上、放在37℃的恒温培养箱中进行2—4天培养，中间定期观察生长状况，防止污染。2.2.3保存备用菌株9将已纯化的放线菌挑入高氏一号斜面上进行保存，保留备用。2.2.4供试菌液配置将供试菌种(毛霉、黑曲霉、枯草芽孢杆菌、金黄葡萄球菌)在超净工作台内用接种环点接至牛肉膏蛋白胨液体培养基试管中，放进28℃摇床中隔夜培养。2.2.5进行拮抗试验第一次实验（主实

7、验）将培养皿用记号笔分成五等分，将菌液涂布在培养皿（牛肉膏蛋白胨固体培养基）上，将以分离纯化出的四种放线菌（后又长出一种记为5号）编号，点接在已涂布的培养皿上，留有空白。在28℃恒温培养箱中培养2—4天，观察抑菌圈测量半径。第二次试验（次实验）培养皿分成两等份，将5、6（6号为一珠有抑菌圈的菌株）点接在PDA培养基上，同时将真菌（黑曲霉）点在放线菌周围，隔天将细菌点在放线菌周围。在恒温箱中培养2-4天，观察抑菌半径，并测量。稀释倍数重叠率/%10^-18210^-27010^-31310^-40（表一）土壤稀释倍数与

8、菌落重叠率（微生物学杂志）3、实验结果与分析93.1实验结果表（表二）123456金黄葡萄球菌____\——=大肠杆菌——\——=啤酒酵母菌=——=————毛霉——\——=黑曲霉——\——+押宝枯草杆菌=——==——++——没有抑制作用；++抑制；+抑制不明显；=没做；污染3.2实验照片图一图二图三图四图五3.3实验结果分