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时间:2019-11-05
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1、以水稻幼苗为实验材料验证硝酸还原酶是一种诱导酶马祥荣15生物科学C1543204000225一、实验目的:让学生理解什么是诱导酶?掌握植物硝酸还原酶(NR)活性测定的原理和技术方法,进一步了解NR在植物氮素同化过程中的作用。二、实验仪器和试剂:1.分光光度计、比色皿、电子天平、保温箱、三角瓶、移液管、试管等。2.3mol·L-1HAc溶液、磺胺、a-萘胺、蒸馏水、硝酸盐等三、实验材料:已经长成的没有被硝酸盐处理过的水稻幼苗。四、实验方法和步骤:(一)先把幼苗分为实验组和对照组,以以下步骤对实验组和对照组的水
2、稻幼苗进行硝酸还原酶活性的测定,步骤如下:1.对实验组幼苗用硝酸盐溶液进行处理,处理后,再将叶片上的残留硝酸盐洗去;对照组用蒸馏水水作对照处理。2.分别取清洗过的幼苗叶子,然后吸干水分。在天平上称取等重的叶子两份,每份约0.3-0.4g,分别置于含有下列溶液的50mL三角瓶中:(1)0.1mol/L磷酸缓冲液5mL+蒸馏水5mL;(2)0.1mol/L磷酸缓冲液5mL+0.2mol/LKNO35mL。3.将三角烧瓶置于真空干燥器中,接上真空泵抽气,放气体后叶片沉入溶液中。4.将三角烧瓶置于30摄氏度恒温箱中
3、保温30min,然后分别吸取反应液1mL于试管,以测定NO2-含量。5.NO2-含量测定:在取好反应液的试管中加入磺胺试剂2mL及a-萘胺试剂2mL,混合摇匀,静置30min,用分光光度计进行测定,记下OD值,从标准曲线上读出NO2-的含量,再计算酶的活力。(二)、对比分析实验组和对照组的硝酸还原酶酶活力。如果,实验组幼苗的硝酸还原酶酶活力远远高于对照组,那么,就可以说明:硝酸还原酶是一种诱导酶,其在硝酸盐等诱导物作用下,酶活性增强。五、参考文献:[1]张志良.植物生理学实验指导(第三版)[M].高等教育出
4、版社,2003.[2]李忠光,龚明.磺胺比色法测定植物组织硝酸还原酶活性的改进[J].植物生理学通讯,2009,45(1):67-68.[3]宋月,崔婷婷,武丽娟,等.玉米叶片硝酸还原酶活性测定方法的优化[J].湖北农业科学,2017(15):2817-2820.
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