实验5 琼脂糖凝胶电泳.ppt

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1、琼脂糖凝胶电泳一实验目的学习琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理和方法检测水稻总DNA的纯度与分子量检测PCR的结果二实验原理电泳是分离和纯化DNA片段的最常用技术琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，沸水中溶解，45℃开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动二实验原理DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同的DNA，分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，是利用分子筛效应，迁移速度与分子量的对数值成反比关

2、系可依据DNA分子的大小使其分离DNA分子在电泳条件下的迁移演示.exeGoodview可与DNA分子形成复合物，发射的荧光强度较游离的Goodview强度大10倍以上，且荧光强度与DAN含量成正比示踪染料和分子量标准参照物二实验原理M1234PCR产物的琼脂糖凝胶电泳三实验材料、用具及试剂提取的水稻总DNA和PCR产物电泳仪，电泳槽，电子水平，移液器，枪头，三角瓶、点样板，微波炉等琼脂糖，TAE电泳缓冲液，Goodview，载样缓冲液（Loadingbuffer）四、实验步骤1制胶：100ml(0.5×TAE)+0.8g琼脂糖三角瓶(

3、1/3)煮胶溶解，冷却至60℃(不烫手)，加Goodview，倒板(4-6mm)，室温下充分凝固，竖直拔下梳子2点样：5μl水稻总DNA+1μ2loadingbuffer=7μlPCR产物+3μlloadingbuffer，混匀，吸取10μl10μlⅢMarkDNA(λDNA-HindⅢ)3电泳：电压3-5V/cm，约80-90V，注意电极方向4观察：紫外透射分析仪下观察，时间不要太久四、实验步骤五注意事项1倒胶时把握好胶的温度，不要高于60℃，否则温度太高会使制板变形2胶一定要凝固好才能拔梳子，方向一定要竖直向上，不要弄坏点样孔3点样

4、时枪头下伸，点样孔内不能有气泡，缓冲液不要太多4Goodview有毒，切勿用手接触，更不要污染环境，胶勿乱扔5紫外线照射不要太久六作业画出电泳图，分析观察到的结果