06色谱分析基础.ppt

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1、第六章色谱分析基础8.1概述分离技术的必要性药物生产过程，要求从天然或合成产物中分离出目标化合物纯净物。分析工作者要在进行具体分析测定之前，要求将干扰测定的物质分离除去。经典的分离方法：沉淀、萃取、吸附过滤、结晶和蒸馏当欲分离的物质化学性质、结构十分相近，如天然物、复杂的合成产物的分离，经典分离方法无能为力现代分离方法——各种色谱分离技术“色谱”一词的由来（chromatography）1906年俄国Tsweet将植物叶子的色素的石油醚提取液通过一根装有CaCO3的细玻璃柱时发现，用石油醚洗脱时，色素

2、各组分在其中相互分离而形成各种不同颜色的谱带—色谱白色阳光通过棱镜后变成红、橙、黄、绿、青、蓝、紫七色彩带—光谱（光的色散）色谱法共同的基本特点是具备两个相：不动的一相，称一为固定相；另一相是携带样品流过固定相的流动体，称为流动相。流动相中样品混合物经过固定相时，各组分的性质和结构不同，与固定相相互作用的类型、强弱也不同，因此在同一推动力的作用下，不同组分在固定相滞留时间长短不同，从而按先后不同的次序从固定相中流出。色谱法分类按固定相的外形分类固定相装于柱内的色谱法，称为柱色谱。固定相呈平板状的色谱

3、法，称为平板色谱，它又可分为薄层色谱和纸色谱。色谱法分类8.2色谱流出曲线及有关术语一．流出曲线和色谱峰二、基线是柱中仅有流动相通过时，检测器响应讯号的记录值。稳定的基线应该是一条水平直线．三、峰高色谱峰顶点与基线之间的垂直距离，以h表示。四、保留值1．死时间tM不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时，从进样到出现峰极大值所需的时间称为死时间。流动相平均线速ū、柱长L与tm之间有如下关系：ū=L/tm2．保留时间tr试样从进样开始到柱后出现峰极大点时所经历的时间，称为保留时间。它相应于样品到达柱末端的

4、检测器所需的时间。3．调整保留时间tr′某组份的保留时间扣除死时间后称为该组份的调整保留时间，即tr′=tr-tmtr′实际上是组份在固定相中停留的总时间．保留时间可用时间单位（如s）或距离单位（如cm）表示。4．死体积VM指色谱柱在填充后，柱管内固定相颗粒间所剩留的空间、色谱仪中管路和连接头间的空间以及检测器的空间的总和．当后两项很小而可忽略不计时，死体积可由死时间与流动相体积流速F0（L／min）计算：VM=tM·F05．保留体积VR指从进样开始到被测组份在柱后出现浓度极大点时所通过的流动相体积:

5、VR=tR·F06．调整保留体积VR′某组份的保留体积扣除死体积后，称该组份的调整保留体积:VR′=VR-VM7．相对保留值γ2,1某组份2的调整保留值与组份1的调整保留值之比，称为相对保留值，也叫选择因子（α）：γ2,1=tr2’/tr1’=Vr2’/Vr1’=α由于相对保留值只与柱温及固定相的性质有关，而与柱径、柱长、填充情况及流动相流速无关，因此，它是色谱法中，特别是气相色谱法中，广泛使用的定性数据．五、区域宽度1.标准偏差σ即0．607倍峰高处色谱峰宽的一半。2.半峰宽W1/2即峰高一半处对应

6、的峰宽。它与标准偏差σ的关系是：W1/2=2.354σ3.基线宽度W即色谱峰两侧拐点上的切线在基线上的截距。它与标准偏差的关系是：W=4σ从色谱流出曲线上，可以得到许多重要信息：（l）根据色谱峰的个数，可以判断样品中所合组份的最少个数．（2）根据色谱峰的保留值(或位置），可以进行定性分析．（3）根据色谱峰下的面积或峰高，可以进行定量分析．（4）色谱峰的保留值及其区域宽度，是评价色谱柱分离效能的依据．（5）色谱峰两峰间的距离，是评价固定相(和流动相)选择是否合适的依据．8.3色谱法分析的基本原理组分达到

7、分离，两峰间的距离是由组分在两相间的分配系数决定的，即与色谱过程的热力学性质有关。峰的宽或窄是由组分在色谱柱中传质和扩散行为决定的，即与色谱过程的动力学性质有关。一、分配系数K和分配比k1．分配系数K分配系数是指在一定温度和压力下，组分在固定相和流动相之间分配达平衡时的浓度之比值，即K=cs/cm2.分配比k分配比又称容量因子，它是指在一定温度和压力下，组分在两相间分配达平衡时，分配在固定相和流动相中的质量比。k=ms/mm3.分配系数K与分配比k的关系K=cs/cm=(ms/Vs)/(mm/Vm)=

8、k·Vm/Vs=k·β其中β称为相比率，它是反映各种色谱柱型特点的又一个参数。例如，对填充柱，其β值一般为6～35；对毛细管柱，其β值为60～600。4．分配系数K及分配比k与选择因子α（相对保留值）的关系对A、B两组分的选择因子，用下式表示α=tr’(B)/tr’(A)=k(B)/k(A)=K(B)/K(A)两组分的K值或k值相差越大，分离越好二、分离度分离度：相邻两组分色谱峰保留值之差与两组分色谱峰底宽总和之半的比值：2121)(2)(211212w