卵清白蛋白提取的.ppt

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1、卵清白蛋白提取的工艺组员：阮金丽刘碧娇魏徐丽梁倩萍·蛋清中各种蛋白的理化性质名称比例分子量KDa等电点卵清蛋白52%454.5伴清蛋白13%786.6溶菌酶11%284.0-4.3卵类粘蛋白3.5%1410.7卵粘蛋白1.5%18(α)400(β)4.7免疫球蛋白<1.0%不同不同工艺流程分离蛋清离子交换层析脱盐预处理收集，检测材料和试剂新鲜鸡蛋Q-SepharoseF.F凝胶G-25Tris-HCl(20mmol/L)HCl（1M）NaOH（1M）Tris-HCl(20mmol/L,pH8.0)NaCl（0.15M）仪器设备

2、离心机紫外检测仪色谱柱分离蛋清将新鲜鸡蛋洗干净，敲碎蛋壳（大头），小心分离出蛋清和蛋黄，取蛋清预处理1将蛋清缓慢搅拌（以不引起泡沫为准）至胶状部分破坏用蛋清两倍体积的20mmol/LTris-HCl稀释（取样SDS-PAGE测蛋白含量）2用1mol/L的HCl调pH至6.0，在2℃条件下缓慢搅拌3h，以沉淀伴清蛋白3在4℃、转速为6000r/min条件下，离心5分钟去除沉淀；4上清液用1mol/LNaOH调整到pH8.0，在4℃，转速15000r/min条件下，离心30min，沉淀卵黏蛋白，取上清液备用。离子交换Q-Sepha

3、roseF.F阴离子柱分离1溶胀在体积分数为20%乙醇中的强阴离子填料Q-SepharoseFF搅匀，取所需量，静置2用pH8.0的20mmol/L的Tris-HCL起始缓冲液置换20%的乙醇溶液3-5次，最终缓冲液与胶体的体积比为1：3备用。3将Q-SepharoseFF装入色谱柱中，最终体积为40mL。用20mmol/LTris-HCL（pH8.0）平衡色谱柱上样将蛋清制备液以3mL/min加入Q-SepharoseFF色谱柱中待吸附饱和后，用20mmol/LTris-HCL（pH8.0）缓冲液冲洗未结合到Q-Sephar

4、oseFF色谱柱上的蛋白，直到记录仪记录线回到基线7洗脱用含0.15mol/LNaCL的20mmol/LTris-HCL（pH8.0）进行洗脱，收集各洗脱液脱盐凝胶柱层析脱盐称取凝胶G-2530g，用0.02mol/L的PBS（pH8.0）500mL热溶胀2h平衡用0.02mol/LPBS（pH8.0）40mL倒进柱，排气泡3装柱待PBS流出20-30min后4上样上样量为床体积的30%洗脱用0.02mol/LPBS（pH8.0）控制速度，保证凝胶上方液面高度为10㎝6收集洗脱液收集，检测收集洗脱液SDS-PAGE检测卵清白蛋

5、白的纯度自己好好看一下，一定要弄清楚每一步的作用，要思考！SDS-PAGE的操作步骤以及所用溶液的配制方法自己找哦。用到层析技术的，装好柱后如何测柱效？结合分离或者仪器分析的课本即可找到相应的资料。加油哦！里面有些参数不一定都是正确的。谢谢