抗凝剂的选择.ppt

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1、抗凝剂的选择概述使用全血和血浆检查，通常采集静脉血，需要使用抗凝剂。所谓抗凝，是用物理或化学方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性，以阻止血液凝固。这种能够阻止血液凝固的物质，称为抗凝剂或抗凝物质。检查的项目不同，所使用的抗凝剂也不同。实验室常用抗凝剂乙二胺四乙酸（EDTA）盐草酸盐肝素枸橼酸盐1.1乙二胺四乙盐（EDTA）常用其钠盐（EDTA-Na2-H2O）或钾盐（EDTA-K2-2H2O），能与血液中钙离子结合成螯合物，而使ca2+失去凝血作用，从而阻止血液凝固。Na2C10H14O8N2+Ca2+CaC10H12O8N2+2Na++2H+EDTA盐对血细胞形态和血小板计数影响很小，适

2、用于多项血液学检查，尤其是血小板计数，但钠溶解度明显低于钾盐，有时影响抗凝效果。EDTA-K2特别适用于全血细胞分析及血细胞比容测定，室温下6h，红细胞体积不改变。根据国际血液学标准化委员会（ICSH）1993年文件建议，血细胞计数用EDTA-K2作抗菌素凝剂，用量为EDTA-K2-2H2O1.5~2.2mg/ml血液。EDTA影响血小板聚集，不适合于作凝血象检查和血小板功能试验。1.2EDTA在检验中的几点注意事项1.抗凝剂浓度过高，渗透压上升，会造成细胞皱缩。EDTA溶液pH与盐类关系较大，低pH可使细胞膨胀。EDTA-K2可使红细胞体积轻度膨胀，采血后短时间内平均血小板体积非常不稳定半小

3、时后趋于稳定。2.EDTA-K2使Ca2+、Mg2+下降，同时使肌酸激酶、碱性磷酸酶降低，EDTA-K2的最佳浓度为1.5mg/ml血液，如果血少，中性粒细胞会肿胀分叶消失，血小板会肿胀、崩解，产生正常血小板的碎片，使分析结果产生错误。3.EDTA由于能抑制或干涉纤维蛋白凝块形成时纤维蛋白单体的聚合，不适于血凝和血小板功能检测，也不适用于钙、钾、钠及含氮物质的测定。4.此外，EDTA能影响某些酶的活性和抑制红斑狼疮因子，故不适合制作组化染色和检查红斑狼疮细胞的血涂片。5.EDTA也可影响到中性粒细胞的形态学特征。这种变化取决于外周血涂片制备的时间和EDTA的浓度。即使EDTA浓度在最佳浓度－1

4、.5mg/ml血液时，也会引起中性粒细胞发生微小的形态学变化。这种变化首先包括中性粒细胞肿胀、分叶结构的消失，随后发生胞浆颗粒的丧失及核和胞浆出现空泡。在标本采集后1－3h间，发生核肿胀，核染色质发生交叉，3h后，中性粒细胞结构模糊并发生碎裂。如果EDTA浓度采用2.5mg/ml时，中心粒细胞及乎全部发生碎裂。6.单核细胞也可发生类似的与时间相关及与EDTA浓度相关的形态学变化，但在程度上轻于中性粒细胞。血小板同样会发生变化，包括肿胀，产生巨血小板，后者发生碎裂后可产生与血小板大小一致的碎片，用电子计数仪计数时导致血小板假性升高。用EDTA作抗凝剂时血小板从盘型变为球形，从而使平均血小板体积测

5、定结果不准确。2.1草酸盐常用的有草酸钠，草酸钾和草酸铵，它们溶解后离的草酸根与标本中的钙离子形成草酸钙沉淀，使Ca2+失去凝血功能。Na2C2O4+Ca2+CaC2O4+2Na+草酸盐抗凝的优点是溶解度好，价廉。2mg草酸盐可抗凝1ml血液。草酸钠通常用0.1mol/L浓度，与血液按1:9比例使用，过去主要用于凝血象检查。实践发现，草酸盐对凝血V因子保护功能差，影响凝血酶原时间测定；另外由于草酸盐与钙结合后形成的沉淀物，影响自动凝血仪的使用，因此，多数认为，凝血象检查选用枸椽酸钠为抗凝剂更为适宜。高浓度钾离子或钠离子易使血细胞脱水皱缩，而草酸铵则可使血细胞膨胀，故测定血细胞比容时用草酸铵和草

6、酸钾或草酸钠两者适当比例混合的抗凝剂，恰好不影响红细胞的形态和体积。2.2草酸盐在检验中的几点注意若用草酸钾或草酸钠作抗凝剂，与肝素为抗凝剂测定的血细胞比容比较，测定值可降低8%~13%，此时的血浆量也相应增加；用它测定血浆中化学成分，结果可低5%左右。标本中如加入高浓度的草酸盐抗凝剂，可发生溶血和改变血液pH，干扰血浆中的钾，钠和氯测定，还能抵制有些酶的活性。由于生成草酸钙沉淀，红细胞会出现锯齿状，白细胞出现空泡，淋巴细胞及单核细胞会变形，不宜做血片检查。草酸盐可使血小板聚集，并影响白细胞形态，不能用于白细胞和血小板分类计数。3.1肝素的一般特性肝素是生理性抗凝剂，广泛存在于肺，肝，脾等几乎

7、所有组织和血管周围肥大细胞和嗜碱性粒细胞的颗粒中。它是一种含硫酸基团的粘多糖，相对分子质量15000，带有较多负电荷。抗凝机制较为复杂，主要是加强抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)灭活丝氨酸蛋白酶的作用，从而阻止凝血酶的形成，并有阻止血小板聚集等多种抗凝作用。此外，肝素还能借助血浆辅助因子（肝素辅助因子Ⅱ）来抑制凝血酶。每毫升血液抗凝需要肝素（1.5±2.5)IU，所用制剂多为肝素的钠盐或钾盐。肝素具有抗凝力