免疫胶体金技术的原理与应用技术.pdf

《免疫胶体金技术的原理与应用技术.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、万方数据14浙江畜牧兽医2010年第3期免疫胶体金技术的原理与应用技术刘爱玲，张少东，唐丽(嘉兴市畜牧兽医局，浙江嘉兴314050)中图分类号：s852．4文献标识码：A文章编号：1005—7307(2010)03—0014一002免疫胶体金技术作为一种新兴的免疫学方法，在免疫组织化学、免疫学、生物分子识别和生物传感器等生物医学领域的研究和应用日益广泛，解决了仪器分析检测成本昂贵、技术要求高、耗时多等问题。本文简要介绍免疫胶体金技术的基本原理及应用技术，供参考。l基本原理胶体金是由氯金酸在还原剂，如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，

2、由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，称为胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物学特性。这种球形的胶体金颗粒对蛋白质有很强的吸附能力，可以与刀豆球素菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽缀合物等非共价结合。根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金已被广泛应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域⋯。免疫胶体金标记技术主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，金标蛋白结合处在显微镜下可

3、见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而常用于定性或定量的快速免疫检测方法中。2应用技术2．1光镜和电镜水平的应用2．1．1光镜水平的应用胶体金一般可用做光镜水平的标记物，取代传统的荧光素、酶等物质，用于普通光镜下检查细胞表面抗原等。这是一种可用于各种细胞切片或组织涂片上测定抗原的一种免疫组织学方法。收稿日期：2009．1l-232．1．2电镜水平的应用胶体金应用电镜水平的研究，其最大优点是可以通过应用不同大小的颗粒或结合酶标进行双重或多重标记，可用于细胞内某些生物活性物质的定位，病毒抗原及血清抗体的检测。胶体金用于电镜水

4、平的研究，主要包括细胞悬液或单层培养中细胞表面抗原的观察；单层培养中细胞内抗原的检测；组织抗原的检测等。2．2免疫学中的应用2．2．1凝集试验单分散的免疫胶体金溶胶呈清澈透明的溶液．其颜色随溶胶颗粒大小而变化．当与相应抗原或抗体发生专一性反应后出现凝聚，溶胶颗粒极度增大，光散射随之发生变化，颗粒也会沉降，溶液的颜色变淡甚至变成无色。这一原理可定性或定量地应用于免疫反应。2．2．2蛋白质印迹技术除用胶体金结合物替代传统蛋白印迹法中的酶或放射性同位素等作标记物外，其原理和操作基本同传统法，但蛋白质印迹技术有以下优点：①信号本底比大；②无处理放射性同位素的麻烦；③结果可

5、长期保存；④可采用银放大技术，灵敏度至少可提高10倍。2．3应用于流式细胞仪中应用荧光素标记的抗体，通过流式细胞仪计数分析细胞表面抗原，是免疫学研究中的重要技术之一。但由于不同荧光素的光谱相互重叠，区分不同的标记比较困难，因此必须寻找一种非荧光素标记物，用于流式细胞计数，这样可以同时进行几种标记。该标记物必须能改变散射角，而胶体金可以明显地改变红激光散射角，利用胶体金标记的羊抗鼠Ig抗体应用于流式细胞术，分析不同类型细胞的表面抗原。2．4快速诊断技术中的应用2．4．1斑点免疫渗滤实验中的应用斑点免疫渗滤试验又名滴金免疫测定法(简称滴金测定法)，其基本原理是以硝酸纤

6、维素膜为载体，利用微孔滤膜的渗滤浓缩和毛细管作用，使抗原抗体反应和洗涤在一特殊的渗滤装置中迅速完成，其后加入胶体金标记的抗体万方数据2010年第3期浙江畜牧兽医15也在渗滤中与已结合在膜上的抗原相结合。因胶体金本身呈红色，阳性反应即在膜中央显示出红色斑点，阴性反应则不会出现这种红色斑点。2．4．2免疫层析实验中的应用免疫层析试验是以硝酸纤维素膜为载体，利用微孑L膜的毛细管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，在移动过程中，可发生相应的抗原抗体反应并通过免疫金的颜色显示出来。DaPengPeng(2007)口3等用免疫层析法和其他方法检测流感病毒，结果说明使用

7、该法的灵敏度明显高于其他方法。K．Kameyama等(2006)旧1于2006年底也研制了针对牛病毒性腹泻的免疫层析快速诊断试剂盒。xue—HaiJin，Hiroa—kiIshiko等(2006)¨3用此法检测结膜炎，取得了非常好的效果。免疫层析实验由于方便快捷，也常被用来进行滥用药物检测。如吗啡测试条／卡、可卡因测试条／板、麻黄碱测试条／板、鸦片毒测试条／板、大麻测试条／板、苯异丙胺(AMP)测试条／卡等，都有方便、快捷等作用。2．5生物传感器上的应用瞄mJH等(2000)p1，通过交流电导法检测了在叉指电极上胶体金标记的免疫凝集，从而实现了胶体金免疫层析试验的

8、电化学检测