实验室常用菌株及特性.doc

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1、.一、实验室常见菌株简介Xl1-Blue菌株基因型：endA1gyrA96(nalR)thi-1recA1relA1lacglnV44F‘[Tn10proAB+lacIqΔ(lacZ)M15]hsdR17(rK-mK+)。特点：具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性。用途：分子克隆和质粒提取。BL21(DE3)菌株基因型：F–ompTgaldcmlonhsdSB(rB-mB-)λ(DE3[lacIlacUV5-T7gene1ind1sam7nin5])。特点：该菌株用于以T7RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ

2、噬菌体DE3区的lacUV5启动子，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达。用途：蛋白质表达。BL21(DE3)ply菌株基因型：F-ompTgaldcmlonhsdSB(rB-mB-)λ(DE3)pLysS(cmR)。特点：该菌株带有pLysS，具有氯霉素抗性。此质粒还有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达。适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。用途：蛋白质表达DH5α菌株基因型：F-endA1glnV44thi-1recA1relA1gyrA96deoRnupGΦ80dlacZΔM15Δ(la

3、cZYA-argF)U169,hsdR17(rK-,λ–特点：一种常用于质粒克隆的菌株。其Φ80dlacZΔM15基因的表达产物与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。JM109菌株基因型：endA1glnV44thi-1relA1gyrA96recA1mcrB+Δ(lac-proAB)e14-[F‘traD36proAB+lacIqlacZΔM15]hsdR17(rK-mK+)。特点：部分抗性缺陷，适合重复基因表达,可用于

4、M13克隆序列测定和蓝白斑筛选。用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。DH10B菌株基因型：F-mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)Φ80dlacZΔM15ΔlacX74endA1recA1deoRΔ(ara,leu)7697araD139galUgalKnupGrpsLλ-ThemostwidelyusedE.colistrainforBACcloningisDH10B。hostforpUCandotherα-complementationvectors;pBR322..usefulforgeneratinggenomiclibrariescontai

5、ningmethylatedcytosineoradenineresidues，usefulforplasmidrescueprocedures。ELECTROMAXDH10BT1CELLS说明：DH10B细胞是高转化效率的E.coli，可以完美应用于大多数实验应用。DH10B基因型具有以下特点：lacZΔM15用于重组克隆的蓝/白斑筛选消除了mcrA、mcrBC、mrr和hsdRMS限制系统，允许构建更多具有代表性的基因组文库(1,2)endA1突变，可以增加质粒产量和数量?高效率转化大小为150kb的质粒，用于产生cDNA或基因组文库DH10B?可以表达ton

6、A的基因型，tonA能够提供对T1和T5噬菌体感染的抗性(DH10B?T1R)。DH10B的基因型：F·mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15ΔlacX74recA1endA1araD139Δ(ara,leu)7697galUgalKλ·rpsL(StrR)nupGDH10BT1R的基因型：F·mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15ΔlacX74recA1endA1araD139Δ(ara,leu)7697galUgalKλ·rpsL(StrR)nupGtonARosetta(DE3)菌株..首先来一些大

7、肠杆菌表达的基本概念：一个完整的表达系统通常包括配套的表达载体和表达菌株，如果是特殊的诱导表达还包括诱导剂，如果是融合表达还包括纯化系统或者Tag检测等等。选择表达系统通常要根据实验目的来考虑，比如表达量高低，目标蛋白的活性，表达产物的纯化方法等等。主要归结在表达载体的选择上。..表达载体：我们关心的质粒上的元件包括启动子，多克隆位点，终止密码，融合Tag（如果有的话），复制子，筛选标记/报告基因等。通常，载体很贵，我们可以通过实验室之间交换得到免费的载体。但是要小心，辗转多个实验室和多个实验室成员之手的载体是否保持原来的遗传背景？MCS是否还是原来那个MCS？是

8、我们要特别