神经生物学研究技术与方法.ppt

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1、神经生物学研究技术与方法电生理技术行为学脑功能成像技术脑立体定位仪又称脑固定装置(stereotaxicapparatus),它是利用颅骨外面的标志或其它参考点所规定的三度坐标系统,来确定皮层下某些神经结构的位置,以便在非直视暴露下对其进行定向的刺激、破坏、注射药物、引导电位等研究。动物脑立体定位仪是神经解剖、神经生理、神经药理和神经外科等领域内的重要研究设备，用于对神经结构进行定向的注射、刺激、破坏、引导电位等操作，可用于帕金森氏病动物模型建立，癫痫动物模型建立，脑内肿瘤模型建立，学习记忆，脑内神经干细

2、胞移植，脑缺血等研究。1脑的立体定位技术stereotaxictechniqueofbrain定位原理bregma大鼠颅骨表面定位图谱海马DualManipulatorStereotaxicFramewith18°or45°EarBars■此儀器為神經解剖、神經生理、神經外科等領域的重要研究設備，WPI的立體定位儀可以提供準確、穩定的定位程序，適用於大多數小型動物的實驗StereotaxicFrame(a)Afteramouseismountedonastereotaxicframeanditsskull

3、isexposed,thebregmaislocalized(arrowhead).Antero-posterior(AP)axisisindicatedonleft.(b)Theneedletipismovedontothebregma(arrowhead).(c)Thetipismovedposteriorlyandlaterallytoanappropriatestereotaxiccoordinate.Thepositionofthetip(arrow)ismarkedbyamarkerpen.(

4、d)Asmallhole(arrow)ismadeintheskullbyusinganelectricdrill.(e)Theneedleisbroughtdowntoanappropriatecoordinatethroughthehole(arrow).DigitalStereotaxicFramewith18°or45°EarBars数位定位仪微量注射器电动颅骨钻MouseandNeonatalRatAdaptor■針對小鼠及幼大鼠頭部構造，提供無創且穩定的固定方式1、根据体重腹腔注射麻醉药待麻醉

5、后固定在定位仪上用双氧水擦除脑膜，直至露出前囟和后囟并标记。找出需要定位的点，电转打孔。进针给药缝合2单细胞记录技术Single-unitrecording胞外动作电位是指通过微电极在细胞外记录到的单细胞动作电位，可以使用玻璃或金属微电极Iftheelectrodeisamicroelectrode,withatipsizeof3to10micrometres,theelectrodewilloftenisolatetheactivityofasingleneuron记录电极电极材料：钨、铂铱合金、不锈钢

6、等尖端形状：尖端钝圆、尖端锐利（角度）绝缘物质和绝缘方法：Epoxy、Glass记录电阻(测量频率1000Hz)：500k2M电极尾端电极个数：单电极、多电极单电极尖端多电极阵列microelectrode玻璃微电极麻醉状态下记录实验方法Plexon放大器玻璃微电极(1-3MΩ)麻醉状态下记录清醒状态下单细胞记录装置学习和记忆的行为学研究1经典的条件反射和操作式条件反射2迷宫学习模型Morriswatermaze水迷宫Eight-armmaze八臂迷宫Y迷宫Ymaze学习和记忆的行为学研究3一次性被动回

7、避跳台实验避暗法-达标训练(Passiveavoidanceresponse,trialstocriterion)小鸡一次性厌恶回避反应学习和记忆的行为学研究延迟性与样本不匹配操作任务（delayednonmatchingtosampletask)。正确的百分率和延迟的时间可作为这一任务的成绩指标。其它方法神经生物学常用形态学研究方法-免疫组化、各种神经元染色法，原为杂交等神经细胞培养方法等