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1、中华人民共和国国家标准食物中烟酸的测定方法GB/T12395—90Methodfordeterminationofniacininfoods━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━1主题内容与适用范围本标准规定了用微生物方法测定食物中的烟酸含量。本标准适用于各类食物中烟酸的测定。2原理某一种微生物的生长,必需某些维生素,例如L.arabinosus17-5之生长需要烟酸,培养基中若缺乏这种维生素该细菌便不能生长。在一定条件下,该细菌生长的情况,以及它的代谢物乳酸的浓度是与培养基中该维生素含量成正比的,因此可以用酸度或浑浊度的测定法来测定样品中烟酸的含量。本
2、方法检出限为10ng。3试剂本实验所用之水均需蒸馏水。所用试剂均需分析纯。3.1甲苯。3.2盐酸:3mol/L溶液。3.3盐酸:1:5(V/V)溶液。3.4硫酸:0.5mol/L溶液。于2000mL的烧杯中先注入700mL水,将28mL硫酸沿烧杯壁慢慢倒入水中,用水稀释至1000ml。3.5冰乙酸:0.02mol/L溶液。3.6氢氧化钠:40％溶液。溶200g氢氧化钠于水中,稀释至500mL。3.7氢氧化钠:0.1mol/L溶液。溶4g氢氧化钠于水中,稀释至1000mL。3.8乙醇:25％(V/V)溶液。3.9酪蛋白:不含维生素。3.9.1不含维生素酪蛋白的制备3.9.1.1乙醇处理法:称取1
3、00g酪蛋白细粉于烧瓶中,加入300mL95％乙醇,在水浴中加热回流1h,减压抽滤,弃去滤液,再加入乙醇回流,如此反复3～4次,至滤液呈微黄色或无色,取出在烘箱内70～80℃干燥即可。3.9.1.2酸洗法:称取250g酪蛋白,置于5L容器中,慢慢加入3.6L水以防止成块,加入浓盐酸2.77mL,搅拌浸泡3min。用虹吸管除去上层清液。加入3.6L水,再加入浓盐酸2.77mL,如此反复8次后,再加水3.6L,加入55.5mL12mol/L氨水,放置过夜,使酪蛋白溶解成浆状。用布过滤,于滤液中慢慢加入约50mL3mol/L盐酸,调至pH4.5,使酪蛋白全部沉淀,过滤。弃去滤液,用50～60℃热水冲
4、洗数次,挤压去水,放入烤箱内于100℃烤干即可。3.10酸解酪蛋白:称取50g不含维生素的酪蛋白于500mL烧杯中,加200mL3mol/L盐酸,于压力蒸汽消毒器内10.3×14**4Pa(151b/in**2)压力下水解6h。将水解物转移至蒸发皿内,在沸水浴上蒸发至膏状。加200mL水使之溶解后再蒸发至膏状,如此反复3次,以除去盐酸。注意每次蒸发时不可蒸干或使之焦糊,因为蒸到这样程度,水解液所含营养物已被破坏。用40％氢氧化钠调节pH至3.5,以溴酚蓝作外指示剂。加20g活性炭,振摇,过滤。如果滤液不呈淡黄色或无色,可用活性炭重复处理。滤液加水稀释至500mL,加少许甲苯于冰箱中保存。3.1
5、1胱氨酸、色氨酸溶液:称取4gL-胱氨酸和1gL-色氨酸(或2gDL-色氨酸)于800mL水中,加热至70～80℃,逐滴加入1:5(V/V)盐酸,不断搅拌,直至完全溶解为止。冷至室温,加水稀释至1000mL。加少许甲苯于冰箱中保存。3.12腺嘌呤、鸟嘌呤、尿嘧啶溶液:称取硫酸腺嘌呤(纯度为98％)、盐酸鸟嘌呤(生化试剂)以及尿嘧啶各0.1g于250mL烧杯中,加75mL水和2mL浓盐酸,然后加热使其完全溶解,冷却,若有沉淀产生,加盐酸数滴,再加热,如此反复,直至冷却后无沉淀产生为止,以水稀释至100mL。加少许甲苯于冰箱中保存。3.13D-泛酸钙、对氨基苯甲酸、盐酸吡哆醇溶液:称取D-泛酸钙、
6、对氨基苯甲酸、盐酸吡哆醇各10mg于烧杯中,以水溶解并稀释至1000mL,将此液置于棕色试剂瓶中,加少许甲苯于冰箱中保存。3.14核黄素、盐酸硫胺素、生物素溶液:溶解1mg生物素结晶于100mL0.02mol/L乙酸中,取此液4mL(相当于40μg生物素)于2000mL烧杯中,加入20mg核黄素和10mg盐酸硫胺素,以0.02mol/L乙酸溶解并稀释至1000mL。加少许甲苯于冰箱中保存,此试剂需保存于棕色瓶中,以防止核黄素被光破坏。3.15甲盐溶液:称取25g磷酸氢二钾(K2HPO4)和25g磷酸二氢钾(KH2PO4),加水溶解后稀释至500ml,加少许甲苯以保存之。3.16乙盐溶液:称取1
7、0g硫酸镁(MgSO4·7H2O)、0.5g氯化钠、0.5g硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)和0.5g硫酸锰(MnSO4·H2O),加水溶解后稀释至500mL,加5滴盐酸,加少许甲苯以保存之。3.17烟酸标准储备液(0.1mg/mL):准确称取50mg已干燥恒重并贮于五氧化二磷干燥器中的烟酸标准品,以25％乙醇溶液溶解并定容至500mL,混匀,于冰箱中保存。此溶液每毫升相当于100μg烟酸。3.1
