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1、生命的化学2004年24卷4期353技术与方法CHEMISTRYOFLIFE2004,24(4)文章编号:10001336(2004)04035303毕赤酵母表达蛋白质的糖基化顾园诸欣平王少华(首都医科大学寄生虫学教研室,北京100054)摘要:毕赤酵母表达系统可对表达产物进行翻译后加工如糖基化等。通过研究其糖基化的特点、影响因素以及对重组蛋白质质产量、功能的影响,介绍如何避免过度糖基化以使表达产物更加符合人类需求。关键词:毕赤酵母;表达;糖基化中图分类号:Q78毕赤酵母(Pichiapastoris)
2、作为一种成功的外源1.1N糖基化当蛋白质含有一致性序列Asn基因表达系统,其应用越来越广泛。该系统的优点XaaThr/Ser(Xaa代表任何氨基酸)时,毕赤酵母能在于操作简便、经济,能够进行复杂的翻译后加工,对其中天门冬氨酸残基上的酰胺氮进行糖基化,产表达水平高。毕赤酵母表达蛋白质的翻译后加工包生N糖基化。括:信号肽加工、蛋白质折叠、二硫键形成、糖基化修毕赤酵母表达的蛋白质的糖基化过程与酿酒酵饰及磷酸化修饰等。毕赤酵母能对表达的蛋白质进母非常相似,然而两者存在差异。首先表现在连接行N和O糖基化。其中N糖基化对于许
3、多蛋白质多糖的大小方面。前者表达的蛋白质每个侧链寡糖的正确折叠、药物动力学稳定性和功能是必需的,人链的平均长度为8~14个甘露糖残基,而后者则为们对其研究也相对深入。50~150个。毕赤酵母表达的蛋白质N糖基化的多1.N糖基化和O糖基化糖大小相对一致,而酿酒酵母表达的蛋白质的多糖大小通常差异很大。此外,多糖的连接形式不同。收稿日期:20040218酿酒酵母核心寡糖含有末端以1,3形式连接的多美国中华医学会(CMB)(Parasitology98674)、北京市教委科技发糖,而以该形式连接的多糖被认为是酿酒酵母分泌展基
4、金(01KJ091)、北京市跨世纪优秀人才工程(20012004)资助项目[1]的蛋白质具有抗原性的原因之一;在毕赤酵母表作者简介:顾园(1973),女,主治医师,硕士生,联系作者,Email:wsgcc@sohu.com;诸欣平,女,教授,博士生导师达的蛋白质的N多糖中则未发现以1,3形式连接于外部甘露糖链的甘露糖。b表明,唾液酸化链可能调节肿瘤细胞和其他细胞以3岩藻糖化增强,许多乳房肿瘤丧失了Le抗原的表达,这和疾病的恶性程度和转移性相关。乳房癌及细胞基质之间的相互作用、影响肿瘤细胞的粘附组织中SLex也有增
5、加。和抗粘附性并延长其在血液中的生存期。3.肿瘤转移参考文献OGalNAc聚糖结构对肿瘤转移的形成是很关[1]TsuijiHetal.Glycobiology,2003,13(7):521527键的。对肝癌细胞株PLC/PEF/5的研究表明含大[2]SekoAetal.Glycobiology,2002,12(6):379388量核心1、核心2结构的OGalNAc聚糖与一种新型[3]SchneiderFetal.CancerRes,2001,61:46054611的肿瘤相关抗粘附素(dysadherin)结合,抑制了
6、抗粘[4]WangFetal.JHistochemCytochem,2001,49:15811592附素的稳定表达并导致E钙粘蛋白表达上调。结[5]MeicheninMetal.CancerRes,2000,60:54995507果促进了细胞之间的粘附作用,促进了肿瘤转移[1]。[6]SekoAetal.Glycobiology,2000,10(9):919929[7]MareLetal.EurJBiochem,2004,271:186194在各种人类结肠癌细胞中,KM12细胞表达与[8]MachidaEetal
7、.CancerRes,2001,61:22262231x粘蛋白链结合的二聚SLe,表现出高度转移性。[9]DalzielMetal.JBiolChem,2001,276(14):1100711015aaKM12HX细胞表达SLe抗原,结果较无SLe表达[10]OtaMetal.CancerRes,2000,60:52615268[10]的KM12LX细胞表现出更强的粘附能力。抑制唾液酸化可以减弱肿瘤细胞的转移能力。以上这些354生命的化学2004年24卷4期TechniquesandMethodsCHEMI
8、STRYOFLIFE2004,24(4)1.2O糖基化毕赤酵母能对蛋白质中苏氨酸达的内葡萄糖基转移酶的甘露糖水平比天然酶更和/或丝氨酸上的羟基进行糖基化,产生O糖基化。高。但糖基化水平的差异对酶活性的影响不显著。对于指定为O
